Home Protein Tyrosine Kinase EGFR Remmer Dacomitinib (PF-299804)

alleen voor onderzoeksdoeleinden

Dacomitinib (PF-299804) HER-remmer

Cat.nr.: S2727

Dacomitinib is een krachtige, irreversibele pan-ErbB-remmer, voornamelijk voor EGFR met een IC50 van 6 nM in een celvrije test. Dacomitinib remt ERBB2 en ERBB4 met een IC50 van respectievelijk 45,7 nM en 73,7 nM. Dacomitinib is effectief tegen NSCLC's met EGFR- of ERBB2-mutaties, evenals die met de EGFR T790M-mutatie. Dacomitinib remt celgroei en induceert apoptosis. Fase 2.
Dacomitinib (PF-299804) EGFR Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 469.94

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: Zuiverheid: 99.84%
99.84

Celkweek, behandeling & werkzame concentratie
(Cell Culture, Treatment & Working Concentration)

Cellijnen Assaytype Concentratie Incubatietijd Formulering Activiteitsbeschrijving PMID
PC9 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR exon 19 deletion activating mutant phosphorylation in human PC9 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.63 nM 23930994
human LoVo cells Function assay 2 h Inhibition of wild type EGFR phosphorylation in human LoVo cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.011 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Function assay 2 h Inhibition of EGFR L858R/T970M double mutant phosphorylation in human NCI-H1975 cells after 2 hrs by fluorescence assay, IC50=0.042 μM 23930994
human NCI-H1975 cells Proliferation assay Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells assessed as growth inhibition, GI50=0.1233 μM 26310890
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB1 (unknown origin) (Met-668 to Ala-1211 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.006 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 2 hrs Irreversible inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in EGF-stimulated mouse NIH/3T3 cells incubated for 2 hrs followed by stimulation with EGF for 10 mins, IC50 = 0.006 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB2 (unknown origin) (Ile-675 to Val-1256 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.046 μM. 27491023
Sf9 Function assay 6 mins Irreversible inhibition of GST-tagged ERBB4 (unknown origin) (Gly-259 to Gly-690 residues) expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in Glu/Tyr copolymer phosphorylation after 6 mins by ELISA, IC50 = 0.074 μM. 27491023
Sf9 Function assay 30 mins Irreversible inhibition of human recombinant GST-tagged JAK3 expressed in baculovirus infected Sf9 insect cells assessed as reduction in polyglutamic acid-tyrosine phosphorylation after 30 mins by ELISA, IC50 = 3.57 μM. 27491023
NIH/3T3 Function assay 30 mg/kg 2 days In vivo inhibition of full length human ERBB1 autophosphorylation transfected in NIH/3T3 cells implanted in mouse at 30 mg/kg, po qd for 2 days measured 24 hrs post last dose by Western blot analysis 27491023
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human EGFR catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.006 μM. 28754471
NCI-H1819 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1819 cells expressing wild type HER2 incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.029 μM. 28754471
insect cells Function assay Inhibition of GST-tagged human HER2 catalytic domain expressed in insect cells, IC50 = 0.0457 μM. 28754471
NCI-H1975 Antiproliferative assay 72 hrs Antiproliferative activity against human NCI-H1975 cells expressing EGFR T790M/L858R mutant incubated for 72 hrs by MTS assay, IC50 = 0.44 μM. 28754471
Klik om meer experimentele gegevens over cellijnen te bekijken

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 469.94 Formule

C24H25ClFN5O2

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 1110813-31-4 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen PF299804,PF299 Smiles COC1=C(C=C2C(=C1)N=CN=C2NC3=CC(=C(C=C3)F)Cl)NC(=O)C=CCN4CCCCC4

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 49 mg/mL (104.26 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 15 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
EGFR
(Cell-free assay)
6.0 nM
ErbB2
(Cell-free assay)
45.7 nM
ErbB4
(Cell-free assay)
73.7 nM
In vitro

PF299804 is a specific inhibitor of the ERBB family of kinases. This compound inhibits EGFR signaling and induces apoptosis in the EGFR T790M-containing H3255 GR cell line. It is effective in -sensitive and NSCLC cell lines. This chemical inhibits the growth of H3255 and HCC827 cells engineered to express EGFR T790M. It inhibits EGFR phosphorylation in the presence of the T790M mutation. This agent is believed to irreversibly inhibit ERBB tyrosine kinase activity through binding at the ATP site and covalent modification of nucleophilic cysteine residues in the catalytic domains of ERBB family members. It shows significant growth-inhibitory effects in HER2-amplified gastric cancer cells (SNU216, N87), and it has lower 50% inhibitory concentration values compared with other EGFR tyrosine kinase inhibitors, including BIBW-2992, and CI-1033. This inhibitor induces apoptosis and G1 arrest and inhibits phosphorylation of receptors in the HER family and downstream signaling pathways including STAT3, AKT, and extracellular signal-regulated kinases (ERK) in HER2-amplified gastric cancer cells. It also blocks EGFR/HER2, HER2/HER3, and HER3/HER4 heterodimer formation as well as the association of HER3 with p85α in SNU216 cells. A recent research uses forty-seven human breast cancer and immortalized breast epithelial lines to evaluate the inhibition effects of this compound, the results indicate it preferentially inhibits growth of HER-2-amplified breast cancer cell lines than nonamplified lines (RR = 3.39, p < 0.0001). This chemical reduces the phosphorylation of HER2, EGFR, HER4, AKT, and ERK in the majority of sensitive lines. It exerts its anti-proliferative effect through a combined G0/G1 arrest and an induction of apoptosis.

Kinase Assay
Op ELISA gebaseerde ERBB-kinase-assay
De ERBB1-, ERBB 2- en ERBB4-cytoplasmatische fusie-eiwitten worden gemaakt door de ERBB1-sequentie (Met-668 tot Ala-1211), ERBB2 (Ile-675 tot Val-1256) en ERBB4-sequentie (Gly-259 tot Gly-690) via PCR te kloneren in de baculovirale vector pFastBac. Eiwitten worden tot expressie gebracht in met baculovirus geïnfecteerde Sf9-insectencellen als GST-fusie-eiwitten. De eiwitten worden gezuiverd door affiniteitschromatografie met behulp van glutathion-sepharose-kralen. Remming van de ERBB-tyrosinekinase-activiteit wordt beoordeeld met behulp van een ELISA-gebaseerde receptortyrosinekinase-assay. Kinasereacties (50 mM HEPES, pH 7,4, 125 mM NaCl, 10 mM MgCl2, 100 μM natriumorthovanadaat, 2 mM dithiothreitol, 20 μM ATP, deze verbinding of voertuigcontrole, en 1-5 nM GST-erbB per 50 μL reactiemengsel) worden uitgevoerd in 96-wells platen gecoat met 0,25 mg/mL poly-Glu-Tyr. De reacties worden gedurende 6 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd terwijl ze worden geschud. Kinasereacties worden gestopt door het reactiemengsel te verwijderen, waarna de wells worden gewassen met wasbuffer (0,1% Tween 20 in PBS). Gefosforyleerde tyrosineresidu's worden gedetecteerd door 0,2 μg/mL antifosfotyrosine-antilichaam (Oncogene Ab-4; 50 μL/well) gekoppeld aan mierikswortelperoxidase (HRP), verdund in PBS met 3% BSA en 0,05% Tween 20, gedurende 25 minuten toe te voegen terwijl er bij kamertemperatuur wordt geschud. Het antilichaam wordt verwijderd en de platen worden gewassen in wasbuffer. HRP-substraat (SureBlue3,3,5,5-tetramethylbenzidine of TMB) wordt toegevoegd (50 μL per well) en geïncubeerd gedurende 10-20 minuten terwijl het bij kamertemperatuur wordt geschud. De TMB-reactie wordt gestopt door toevoeging van 50 μL stopoplossing (0,09 N H2SO4). Het signaal wordt gekwantificeerd door de absorptie bij 450 nm te meten. IC50-waarden voor deze verbinding worden bepaald met behulp van de mediaan-effectmethode.
In vivo

Orally administered PF299804 effectively inhibits growth of HCC827 Del/T790M xenografts. Low oral administration of this compound (15mg/kg) causes significant antitumor activity, including marked tumor regressions in a variety of human tumor xenograft models that express and/ or overexpress ERBB family members or contain the double mutation (L858R/T790M) in ERBB1 (EGFR).

Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22761403/

Toepassingen (Applications)

Methoden Biomarkers Afbeeldingen PMID
Western blot pEGFR / EGFR / pERK / ERK / pAKT / AKT / p-mTOR / mTOR / pSTAT3 / STAT3
S2727-WB1
24853121
Immunofluorescence LC3
S2727-IF1
28366635
Growth inhibition assay Cell viability
S2727-viability1
28363995

Informatie over klinische proeven (Clinical Trial Information)

(gegevens van https://clinicaltrials.gov, bijgewerkt op 2024-05-22)

NCT-nummer Werving Aandoeningen Sponsor/medewerkers Startdatum Fasen
NCT06075615 Not yet recruiting
Carcinoma Non-Small-Cell Lung
Pfizer
 September 1 2024 --
NCT06321510 Not yet recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 April 1 2024 --
NCT04609319 Active not recruiting
Lung Cancer
Pfizer
 January 23 2021 --
NCT03865446 Completed
Severe Hepatic Impairment
Pfizer
 April 5 2019 Phase 1
NCT02382796 Completed
NSCLC
Pfizer
 July 10 2015 Phase 2
NCT02268747 Unknown status
Skin Squamous Cell Cancer
Fondazione IRCCS Istituto Nazionale dei Tumori Milano
 November 2014 Phase 2

Veelgestelde vragen (Frequently Asked Questions)

Vraag 1:
I would like to know whether the in vivo formulation you recommend for it is suitable for oral administration?

Antwoord:
S2727 in 1% DMSO+30% polyethylene glycol+1% Tween 80 at 10mg/ml is a homogeneous suspension, and it was fine for oral gavage. When preparing the solution, please dissolve it in DMSO clearly first. If it dissolves not readily, please sonicate and warm it at about 45-50℃ for a while to help dissolving. Then add PEG 300 and Tween 80. After they mixed well, dilute with water. Then it will become a homogeneous suspension.