Home PI3K/Akt/mTOR mTOR remmer WYE-687

alleen voor onderzoeksdoeleinden

WYE-687 mTOR remmer

Cat.nr.S2668

WYE-687 is een ATP-competitieve en selectieve remmer van mTOR met een IC50 van 7 nM; deze verbinding blokkeert mTORC1/pS6K(T389) en mTORC2/P-AKT(S473), maar er wordt geen effect waargenomen op P-AKT(T308). De selectiviteit voor mTOR is groter dan voor PI3Kα (>100-voudig) en PI3Kγ (>500-voudig).
WYE-687 mTOR remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 528.61

Spring naar

Kwaliteitscontrole

Batch: S266801 5%TFA]3.04 mg/mL]false]DMSO]0.5 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Zuiverheid: 99.56%
  • Geciteerd in Nature Medicine vanwege de topkwaliteit
  • COA
  • NMR
  • HPLC
  • SDS
  • Datasheet
99.56

Chemische informatie, opslag en stabiliteit

Molecuulgewicht 528.61 Formule

C28H32N8O3

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 1062161-90-3 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles COC(=O)NC1=CC=C(C=C1)C2=NC3=C(C=NN3C4CCN(CC4)CC5=CN=CC=C5)C(=N2)N6CCOCC6

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

5%TFA : 3.04 mg/mL

DMSO : 0.5 mg/mL (0.94 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC50/Ki
mTOR
7 nM
In vitro
Immuno-complex kinase-assay toont aan dat het mTORC2-specifieke substraat His6-AKT of het mTORC1-substraat His6-S6K dosisafhankelijk wordt geremd door WYE-687. Deze verbinding remt de mTOR-signalering en AKT-functie in cellulaire modellen globaal en dosisafhankelijk. Het remt diepgaand de cap-afhankelijke en globale eiwitsynthese in MDA361, menselijke borstkankercellen. Dit chemische middel vertoont antiproliferatieve effecten in verschillende kankercellijnen, waaronder G1-celcyclusarrest en selectieve apoptose. Het downreguleert angiogene factoren, VEGF en HIF-1α, in U87MG-, MDA361- en LNCap-cellen.
Kinase Assay
DELFIA-formaat van gezuiverd FLAG-TOR
De routineassays met gezuiverd FLAG-TOR (FL en 3.5) worden als volgt uitgevoerd in 96-wells platen. Enzymen worden eerst verdund in kinase-assaybuffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycerofosfaat, 10 mM MnCl2, 0.5 mM DTT, 0.25 μM microcystine LR en 100 μg/mL BSA). In elke put worden 12 μL van het verdunde enzym kort gemengd met 0.5 μL testremmer of controlevoertuig dimethylsulfoxide (DMSO). De kinase-reactie wordt geïnitieerd door 12.5 μL kinase-assaybuffer met ATP en His6-S6K toe te voegen, om een finaal reactievolume van 25 μL te verkrijgen met 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP en 1.25 μM His6-S6K. De reactieplaat wordt 2 uur (lineair bij 1-6 uur) bij kamertemperatuur geïncubeerd met zacht schudden en vervolgens beëindigd door toevoeging van 25 μL stopbuffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA en 20 mM EGTA). De DELFIA-detectie van het gefosforyleerde (Thr-389) His6-S6K wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur met behulp van een monoklonaal anti-P(T389)-p70S6K antilichaam (1A5) gelabeld met Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per antilichaam). Vijfenveertig microliter van het beëindigde kinase-reactiemengsel wordt overgebracht naar een MaxiSorp-plaat met 55 μL PBS. De His6-S6K mag 2 uur hechten, waarna de putten worden geaspireerd en eenmaal met PBS worden gewassen. Honderd microliter DELFIA-buffer met 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K antilichaam wordt toegevoegd. De antilichaambinding wordt 1 uur voortgezet met zachte agitatie. De putten worden vervolgens geaspireerd en viermaal gewassen met PBS dat 0.05% Tween 20 (PBST) bevat. Honderd microliter DELFIA Enhancement-oplossing wordt aan elke put toegevoegd en de platen worden afgelezen in een PerkinElmer Victor model platenlezer. Verkregen gegevens worden gebruikt om enzymatische activiteit en enzymremming door potentiële remmers te berekenen.
Referenties

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, laat dan een bericht achter.

Voer uw naam in.
Voer uw e-mailadres in. Voer een geldig e-mailadres in.
Schrijf alstublieft iets voor ons.