WYE-687

CatalogusnummerS2668 Batch:S266801

Technische gegevens

Formule	C₂₈H₃₂N₈O₃
Moleculair gewicht	528.61	CAS-nr.	1062161-90-3
Oplosbaarheid (25°C)*	In vitro	5%TFA	3.04 mg/mL (5.75 mM)
		DMSO	0.5 mg/mL (0.94 mM)
		Water	Insoluble
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

WYE-687 is een ATP-competitieve en selectieve remmer van mTOR met een IC50 van 7 nM; deze verbinding blokkeert mTORC1/pS6K(T389) en mTORC2/P-AKT(S473), maar er wordt geen effect waargenomen op P-AKT(T308). De selectiviteit voor mTOR is groter dan voor PI3Kα (>100-voudig) en PI3Kγ (>500-voudig).

Doelen

mTOR

7 nM

In vitro

Immuno-complex kinase-assay toont aan dat het mTORC2-specifieke substraat His6-AKT of het mTORC1-substraat His6-S6K dosisafhankelijk wordt geremd door WYE-687. Deze verbinding remt de mTOR-signalering en AKT-functie in cellulaire modellen globaal en dosisafhankelijk. Het remt diepgaand de cap-afhankelijke en globale eiwitsynthese in MDA361, menselijke borstkankercellen. Dit chemische middel vertoont antiproliferatieve effecten in verschillende kankercellijnen, waaronder G1-celcyclusarrest en selectieve apoptose. Het downreguleert angiogene factoren, VEGF en HIF-1α, in U87MG-, MDA361- en LNCap-cellen.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	DELFIA-formaat van gezuiverd FLAG-TOR De routineassays met gezuiverd FLAG-TOR (FL en 3.5) worden als volgt uitgevoerd in 96-wells platen. Enzymen worden eerst verdund in kinase-assaybuffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycerofosfaat, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 μM microcystine LR en 100 μg/mL BSA). In elke put worden 12 μL van het verdunde enzym kort gemengd met 0.5 μL testremmer of controlevoertuig dimethylsulfoxide (DMSO). De kinase-reactie wordt geïnitieerd door 12.5 μL kinase-assaybuffer met ATP en His6-S6K toe te voegen, om een finaal reactievolume van 25 μL te verkrijgen met 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP en 1.25 μM His6-S6K. De reactieplaat wordt 2 uur (lineair bij 1-6 uur) bij kamertemperatuur geïncubeerd met zacht schudden en vervolgens beëindigd door toevoeging van 25 μL stopbuffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA en 20 mM EGTA). De DELFIA-detectie van het gefosforyleerde (Thr-389) His6-S6K wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur met behulp van een monoklonaal anti-P(T389)-p70S6K antilichaam (1A5) gelabeld met Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per antilichaam). Vijfenveertig microliter van het beëindigde kinase-reactiemengsel wordt overgebracht naar een MaxiSorp-plaat met 55 μL PBS. De His6-S6K mag 2 uur hechten, waarna de putten worden geaspireerd en eenmaal met PBS worden gewassen. Honderd microliter DELFIA-buffer met 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K antilichaam wordt toegevoegd. De antilichaambinding wordt 1 uur voortgezet met zachte agitatie. De putten worden vervolgens geaspireerd en viermaal gewassen met PBS dat 0.05% Tween 20 (PBST) bevat. Honderd microliter DELFIA Enhancement-oplossing wordt aan elke put toegevoegd en de platen worden afgelezen in een PerkinElmer Victor model platenlezer. Verkregen gegevens worden gebruikt om enzymatische activiteit en enzymremming door potentiële remmers te berekenen.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells Concentraties 0-100 μM Incubatietijd 24 or 48 hours Methode For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Kinase-assay:^{^[1]}

DELFIA-formaat van gezuiverd FLAG-TOR
De routineassays met gezuiverd FLAG-TOR (FL en 3.5) worden als volgt uitgevoerd in 96-wells platen. Enzymen worden eerst verdund in kinase-assaybuffer (10 mM Hepes (pH 7.4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycerofosfaat, 10 mM MnCl₂, 0.5 mM DTT, 0.25 μM microcystine LR en 100 μg/mL BSA). In elke put worden 12 μL van het verdunde enzym kort gemengd met 0.5 μL testremmer of controlevoertuig dimethylsulfoxide (DMSO). De kinase-reactie wordt geïnitieerd door 12.5 μL kinase-assaybuffer met ATP en His6-S6K toe te voegen, om een finaal reactievolume van 25 μL te verkrijgen met 800 ng/mL FLAG-TOR, 100 μM ATP en 1.25 μM His6-S6K. De reactieplaat wordt 2 uur (lineair bij 1-6 uur) bij kamertemperatuur geïncubeerd met zacht schudden en vervolgens beëindigd door toevoeging van 25 μL stopbuffer (20 mM Hepes (pH 7.4), 20 mM EDTA en 20 mM EGTA). De DELFIA-detectie van het gefosforyleerde (Thr-389) His6-S6K wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur met behulp van een monoklonaal anti-P(T389)-p70S6K antilichaam (1A5) gelabeld met Europium-N1-ITC (Eu) (10.4 Eu per antilichaam). Vijfenveertig microliter van het beëindigde kinase-reactiemengsel wordt overgebracht naar een MaxiSorp-plaat met 55 μL PBS. De His6-S6K mag 2 uur hechten, waarna de putten worden geaspireerd en eenmaal met PBS worden gewassen. Honderd microliter DELFIA-buffer met 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K antilichaam wordt toegevoegd. De antilichaambinding wordt 1 uur voortgezet met zachte agitatie. De putten worden vervolgens geaspireerd en viermaal gewassen met PBS dat 0.05% Tween 20 (PBST) bevat. Honderd microliter DELFIA Enhancement-oplossing wordt aan elke put toegevoegd en de platen worden afgelezen in een PerkinElmer Victor model platenlezer. Verkregen gegevens worden gebruikt om enzymatische activiteit en enzymremming door potentiële remmers te berekenen.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
MDA361, U87MG, HCT116, LNCap and HT29 cells
Concentraties
0-100 μM
Incubatietijd
24 or 48 hours
Methode
For cell cycle analysis, cells are seeded in 96-well culture plates at 10,000 cells per well for 24 hours, treated with various inhibitors for 24 hours or 48 hours. Following treatment, cells are harvested, washed with PBS and fixed overnight at -20 °C in 70% ethanol. Cells are washed, stained with propidium iodide and analyzed for cell cycle profile (acquired 5000 cells/well) on Guava PCA-96 instrument according to the Guava Cell Cycle Protocol

Referenties

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=WYE-687

Klantproductvalidatie

: , , J Hepatol, 2016, 64(3):609-17.

Sellecks WYE-687 Is geciteerd door 1 Publicatie

Laminin-332 sustains chemoresistance and quiescence as part of the human hepatic cancer stem cell niche [Govaere O, et al. J Hepatol, 2015, 10.1016/j.jhep.2015.11.011]	PubMed: 26592953

Laminin-332 sustains chemoresistance and quiescence as part of the human hepatic cancer stem cell niche [Govaere O, et al. J Hepatol, 2015, 10.1016/j.jhep.2015.11.011]

PubMed: 26592953

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.