Name: OSI-027
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S2624
Rating: 5 (40 reviews)

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: Zuiverheid: 99.19%

99.19

Gerelateerde doelwitten	PI3K Akt GSK-3 ATM/ATR DNA-PK AMPK PDPK1 PTEN PP2A PDK
Overige mTOR Inhibitoren	Torin 1 Torin 2 AZD8055 Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669) Sapanisertib (MLN0128, INK-128) Torkinib (PP242) MHY1485 Vistusertib (AZD2014) KU-0063794 WYE-354

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen	Assaytype	Incubatietijd	Activiteitsbeschrijving
human SQ20B cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human SQ20B cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=1.3 μM
human Caki1 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human Caki1 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=1.9 μM
human SKHEP1 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human SKHEP1 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=3.2 μM
human DU145 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human DU145 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=4.1 μM
human HCT116 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HCT116 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.6 μM
human ColoR cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human ColoR cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.8 μM
human COLO205 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human COLO205 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=5.8 μM
human OVCAR3 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human OVCAR3 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=8.1 μM
human HOP62 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HOP62 cells after 72 hrs by MTT assay, IC50=41 μM
human COLO205 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human COLO205 cells after 72 hrs by MTT assay
human HOP62 cells	Cytotoxicity assay	72 h	Cytotoxicity against human HOP62 cells after 72 hrs by MTT assay
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht	406.44	Formule	C₂₁H₂₂N₆O₃	Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)	3 jaar-20°Cpoeder
CAS-nr.	936890-98-1	SDF downloaden		Opslag van stamoplossingen	1 jaar-80°Cin oplosmiddel 1 maand-20°Cin oplosmiddel
Synoniemen	ASP4786, CERC 006, AEVI-006			Smiles	COC1=CC=CC2=C1NC(=C2)C3=C4C(=NC=NN4C(=N3)C5CCC(CC5)C(=O)O)N

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 18 mg/mL (44.28 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Water : Insoluble

Ethanol : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa	Concentratie	Volume	Moleculair gewicht
=	×	×

Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo Batch:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

Dosering: mg/kg Gemiddeld gewicht van dieren: g Doseervolume per dier:μL Aantal dieren:

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH₂O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC₅₀/Ki	mTOR (Cell-free assay) 4 nM mTORC1 (Cell-free assay) 22 nM mTORC2 (Cell-free assay) 65 nM PI3Kγ (Cell-free assay) 0.42 μM
In vitro	OSI-027 vertoont selectieve en ATP-competitieve remmende activiteiten tegen mTORC1 en mTORC2 met respectievelijk IC50 van 22 nM en 65 nM. Bovendien remt deze verbinding de mTOR-signalering van gefosforyleerd 4E-BP1 met een IC50 van 1 R M in celgebaseerde assays. Het vertoont antiproliferatieve activiteiten tegen verschillende acute leukemie-cellijnen van myeloïde/megakaryocytaire oorsprong op een dosisafhankelijke manier, waaronder U937, KG-1, KBM-3B, ML-1, HL-60 en MEG-01 cellen. Een recente studie toont aan dat remming van mTORC1/2 door deze chemische stof effectief de fosforylering van Akt (S473) en celproliferatie in borstkankercellen onderdrukt.
Kinase Assay	Biochemische assays
Kinase Assay	mTORC1- en mTORC2-remming wordt getest met behulp van natief enzymcomplex, geïmmunoprecipiteerd uit HeLa-lysaten bij 1 mM ATP. Om hele cellysaten van HeLa-cellen te bereiden, wordt 25 g celpellet gedurende 30 minuten in 60 mL ijskoude buffer A [40 mM HEPES (pH 7,5), 120 mM NaCl, 1 mM EDTA, 10 mM natriumpyrofosfaat, 10 mM glycerofosfaat, 50 mM NaF, 0,5 mM orthovanadaat en EDTA-vrije protease-remmers met 0,3% CHAPS] op een magnetische roerder in een koelcel gelyseerd. Na het klaren van de lysaten door centrifugatie bij 13.000 g gedurende 10 minuten, worden met proteïne G gecoate 384-wells platen geïncubeerd met 0,25 R g mTOR-antilichaam in 15 R L buffer A gedurende 1 uur bij 4 R C. Aan elke put wordt 40 R g HeLa-celysaat in 15 R L buffer A toegevoegd en 's nachts bij 4 R C geïncubeerd om mTOR-complexen te immunoprecipiteren. Platen worden 3 keer gewassen met buffer A en twee keer met immunoprecipitatie-wasbuffer [Buffer B: 50 mM HEPES (pH 7,5) en 150 mM NaCl]. OSI-027 wordt in een concentratie van 10 R M aan elke put toegevoegd en DMSO wordt aan de controleputten toegevoegd. De reactie wordt gestart door 150 ng His-getagd 4E-BP1 als substraat toe te voegen in aanwezigheid of afwezigheid van 100 R M ATP aan elke put in 25 R L vers bereide kinasebuffer [Buffer C: 20 mM HEPES (pH 7,5), 10 mM MgCl₂, 4 mM MnCl₂, 10 mM R -mercapto-ethanol en 200 R M vanadaat] en 30 minuten bij kamertemperatuur (RT) geïncubeerd. De reactie wordt gestopt door 25 R L reactiemengsel van elke put naar corresponderende putten van verse, met Ni-chelaat gecoate platen over te brengen en 's nachts bij 4 R C gevolgd door 2 uur bij 37 R C geïncubeerd. Om fosforylering van 4E-BP1 te detecteren, worden de platen eenmaal gewassen met TBST (Tris-gebufferde zoutoplossing met 0,1% Tween-20) met 5% magere melkpoeder. Aan elke put wordt 25 R L 1:1.000 verdunde gefosforyleerde 4E-BP1-antilichamen in TBST met 5% magere melk toegevoegd en 1 uur bij RT geïncubeerd. De platen worden eenmaal gewassen met TBST en vervolgens wordt 25 R L anti-konijn HRP (1:10.000 verdund) in TBST met 5% magere melk toegevoegd. De platen worden 1 uur bij RT geïncubeerd en 5 keer gewassen met TBST. Voor de detectie van gefosforyleerd 4E-BP1 wordt 25 R L chemiluminescentiereagens A+B toegevoegd en de chemiluminescentie wordt gemeten met een Analyst-plaatlezer.
In vivo	In GEO colorectaal xenograft remt OSI-027 (65 mg/kg) zowel mTORC1- als mTORC2-effectoren, inclusief 4E-BP1, Akt en S6-fosforylering. Bovendien remt de gecombineerde remming van mTORC1 en mTORC2 door deze verbinding de tumorgroei krachtiger dan de mTORC1-remming door rapamycine.
Referenties	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21363918/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21415215/ [3] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22476852/ [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/21673091/

Toepassingen

Methoden	Biomarkers	PMID
Western blot	p-mTOR / mTOR / p-AKT / AKT / p-P70S6K / P70S6K / p-4EBP1 / 4EBP1	26026051
Immunofluorescence	LC3	24610825
Growth inhibition assay	Cell viability	25823922