Home PI3K/Akt/mTOR PDK Remmer BX-912

alleen voor onderzoeksdoeleinden

BX-912 PDK Remmer

Cat.nr.: S1275

BX-912 is een krachtige en specifieke PDK1-remmer met een IC50 van 12 nM, en een respectievelijk 9- en 105-voudig grotere selectiviteit voor PDK1 dan voor PKA en PKC in celvrije assays. In vergelijking met GSK3β is de selectiviteit voor PDK1 600-voudig.
BX-912 PDK Remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 471.35

Spring naar

Kwaliteitscontrole (Quality Control)

Batch: S127501 DMSO]94 mg/mL]false]Ethanol]94 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Zuiverheid: 99.80%
  • Geciteerd in Nature Medicine vanwege de topkwaliteit
  • COA
  • NMR
  • SDS
  • Datasheet
99.80

Chemische informatie, opslag en stabiliteit (Chemical Information, Storage & Stability)

Molecuulgewicht 471.35 Formule

C20H23BrN8O

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 702674-56-4 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles C1CCN(C1)C(=O)NC2=CC=CC(=C2)NC3=NC=C(C(=N3)NCCC4=CN=CN4)Br

Oplosbaarheid (Solubility)

In vitro
Batch:

DMSO : 94 mg/mL (199.42 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 94 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme (Mechanism of Action)

Targets/IC50/Ki
PDK-1
(Cell-free assay)
12 nM
PKA
(Cell-free assay)
110 nM
KDR
(Cell-free assay)
410 nM
CDK2/CyclinE
(Cell-free assay)
650 nM
Chk1
(Cell-free assay)
830 nM
c-Kit
(Cell-free assay)
850 nM
In vitro
BX912 prevents ChcK1, PKA, c-kit, and KDR with IC50 of 0.83, 0.11, 0.85, and 0.41 μM, resepectively. BX912 blocks PDK1/Akt signaling in tumor cells and suppresses the anchorage-dependent growth of a variety of tumor cell lines (such as PC-3 cells ) in culture or induces apoptosis. A number of cancer cell lines (such as MDA-468 breast cancer) with elevated Akt activity are >30-fold more sensitive to growth inhibition by PDK1 inhibitor BX912 in soft agar than on tissue culture plastic, consistent with the cell survival function of the PDK1/Akt signaling pathway, which is particularly important for unattached cells. BX912 potently blocks PDK1 enzyme activity in a direct kinase assay format, although BX912 fails to block preactivated AKT2 activity (IC50 > 10 μM). Therefore, BX-912 is a direct inhibitor of PDK1. BX912 is a competitive inhibitor of PDK1 activity with respect to its substrate, ATP, suggesting that BX912 binds to the ATP binding pocket of PDK1. The aminopyrimidine backbone of BX912 adopts a similar orientation in the active site of PDK1. BX912 promotes a pronounced increase in the population of MDA-468 cells with 4 N DNA content, indicative of a block at the G2/M phase of the cell cycle. BX912 also potently inhibits the growth of HCT-116 cells in soft agar, showing a 96% inhibitory effect at a dose of 1 μM. BX912 potently inhibits the growth of PC-3 cells in soft agar, displaying IC50 of 0.32 μM.
Kinase Assay
Kinase-assays
PDK1 wordt geanalyseerd in een directe kinase-assay en een gekoppeld assay-formaat dat de door PDK1 en PtdIns-3,4-P2 gemedieerde activering van AKT2 meet. Voor de gekoppelde assay bevatte het uiteindelijke assay-mengsel (60 μL): 15 mM MOPS, pH 7,2, 1 mg/mL runderserumalbumine, 18 mM β-glycerolfosfaat, 0,7 mM dithiothreitol, 3 mM EGTA, 10 mM MgOAc, 7,5 μM ATP, 0,2 μCi [γ- 33P]ATP, 7,5 μM gebiotinyleerd peptide-substraat (biotin-ARRRDGGGAQPFRPRAATF), 0,5 μL PtdIns-3,4-P2-bevattende fosfolipidenblaasjes, 60 pg gezuiverd recombinant humaan PDK1 en 172 ng gezuiverd recombinant humaan AKT2. Na incubatie gedurende 2 uur bij kamertemperatuur wordt het biotine-gelabelde peptide uit 10 μL van het assay-mengsel op met streptavidine gecoate SPA-kralen opgevangen, en wordt de productvorming gemeten door middel van scintillatie-nabijheid in een Wallac MicroBeta-teller. Het gevormde product is evenredig met de incubatietijd en de hoeveelheid toegevoegde PDK1 en inactief AKT2. PDK1 wordt toegevoegd op suboptimale niveaus zodat de assay gevoelig remmers van AKT2-activering evenals de directe remmer BX-912 van PDK1 of AKT2 kan detecteren. Om de PDK1-activiteit direct te meten, bevatte het uiteindelijke assay-mengsel (60 μL) 50 mM Tris-HCl, pH 7,5, 0,1 mM EGTA, 0,1 mM EDTA, 0,1% β-mercapto-ethanol, 1 mg/mL runderserumalbumine, 10 mM MgOAc, 10 μM ATP, 0,2 μCi [γ-33P]ATP, 7,5 μM substraatpeptide (H2N-ARRRGVTTKTFCGT) en 60 ng gezuiverd recombinant humaan PDK1. Na 4 uur bij kamertemperatuur wordt 25 mM EDTA toegevoegd en wordt een portie van het reactiemengsel op P81-fosfocellulosepapier aangebracht. Het filtreerpapier wordt drie keer gewassen met 0,75% fosforzuur en één keer met aceton. Na droging wordt het filtergebonden gelabelde peptide gekwantificeerd met behulp van een phosphorimager.
Referenties