JC-1 Dyes chemisch

1. Neem de 6-well plaat als voorbeeld voor celplating, en de dichtheid is 5 ×10^5/mL. Incubeer 's nachts in een 5% CO2 incubator bij 37℃.
Opmerking: er wordt gesuggereerd dat de celdichtheid tijdens apoptose-inductie niet hoger mag zijn dan 1 ×10^6/ml, die ook kan worden gekweekt tot de geschikte dichtheid volgens uw eigen celtype.
2. Neem 0,5 mL suspensie in een steriele centrifugebuis; 400 g centrifugatie gedurende 3-5 min; Verwijder het supernatant.
3. De cellen werden geresuspendeerd met 1ml van deze compound werkoplossing en geïncubeerd in een 5% CO2 incubator bij 37℃ gedurende 15-30 min.
4. Centrifugatie bij kamertemperatuur gedurende 5 min bij 400 g; Zuig het supernatant af.
5. De cellen werden geresuspendeerd met 2 mL celkweekmedium of buffer, en vervolgens gecentrifugeerd bij kamertemperatuur gedurende 5 min bij 400 g; Verwijder het supernatant en herhaal tweemaal.
6. Resuspendeer de cellen met 1 ml vers kweekmedium of buffer, en voer onmiddellijk de daaropvolgende flowcytometrie of fluorescentiemicroscopieobservatie uit.
7. Gegevensanalyse (flowcytometrie): mitochondria van gezonde cellen die rode aggregaten van dit compound bevatten, werden gedetecteerd door het FL2-kanaal; Apoptotische of ongezonde cellen die groene monomeren van dit compound bevatten, werden gedetecteerd door het FL1 (FITC)-kanaal.
8. Indien gebruikt voor een enzymlabelingsinstrument, gebruik 300 μL buffer geresuspendeerde cellen; Dan 100 per gat μ Breng de gekleurde cellen over naar een lichtdichte 96-well plaat met de hoeveelheid L, en voer vervolgens fluorescentie-enzymlabelplaat-analyse uit.