Home Neuronal Signaling CaMK remmer NH125

alleen voor onderzoeksdoeleinden

NH125 CaMK remmer

Cat.nr.S7436

NH125 is een selectieve eEF-2 kinase remmer met een IC50 van 60 nM, >125-voudige selectiviteit ten opzichte van PKC, PKA en CaMKII, en tevens een potente histidine kinase remmer.
NH125 CaMK remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Molecuulgewicht: 524.56

Spring naar

Kwaliteitscontrole

Batch: S743601 DMSO]100 mg/mL]false]Ethanol]100 mg/mL]false]Water]Insoluble]false Zuiverheid: 99.91%
  • Geciteerd in Nature Medicine vanwege de topkwaliteit
  • COA
  • NMR
  • SDS
  • Datasheet
99.91

Chemische informatie, opslag en stabiliteit

Molecuulgewicht 524.56 Formule

C27H45IN2

 Opslag (vanaf de datum van ontvangst)
CAS-nr. 278603-08-0 SDF downloaden Opslag van stamoplossingen

Synoniemen N/A Smiles CCCCCCCCCCCCCCCCN1C=C[N+](=C1C)CC2=CC=CC=C2.[I-]

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (190.63 mM)
(Met vocht verontreinigd DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa Concentratie Volume Molecuulgewicht
Verdunningscalculator Molecuulgewichtcalculator

In vivo
Batch:

In vivo formulatiecalculator (heldere oplossing)

Stap 1: Voer onderstaande informatie in (Aanbevolen: een extra dier om rekening te houden met verlies tijdens het experiment)

mg/kg g μL

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in de sectie oplosbaarheid.)

% DMSO % % Tween 80 % ddH2O
%DMSO %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-moedervloeistof: mg geneesmiddel vooropgelost in μL DMSO ( Concentratie moedervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de batch van het geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toeμL PEG300, mengen en verhelderen, daarna toevoegenμL Tween 80, mengen en verhelderen, daarna toevoegen μL ddH2O, mengen en verhelderen.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO moedervloeistof, voeg daarna toe μL Maïsolie, mengen en verhelderen.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysieke methoden zoals vortexen, ultrasoon of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC50/Ki
eEF-2 kinase
60 nM
In vitro
In C6 glioomcellen verlaagt NH125 het cellulaire gehalte aan fosfo-eEF-2 zonder het totale eEF-2 gehalte te beïnvloeden, en blokkeert het de celcyclusovergang bij de G1-S grens. Deze verbinding remt krachtig de cellevensvatbaarheid van 10 kankercellen met IC50 variërend van 0,7 tot 4,8 μM. Het remt effectief histidine proteïnekinasen, waaronder Envz, PhoQ, BvgS, EvgS, en produceert daardoor potente antibacteriële activiteiten tegen oxacilline-resistente Staphylococcus aureus (ORSA), vancomycine-resistente Enterococcus faecalis (VRE), penicilline-resistente Streptococcus pneumoniae (PRS), en andere Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën. EEF2K-remming door deze chemische stof maakt tumorcellen gevoeliger voor curcumine en velcade, die een ER-stress-inducerende werking hebben.
Kinase Assay
eEF-2 Kinase Assay
De eEF-2 kinase activiteit wordt gemeten met twee methoden: (a) een filter-gebaseerde assay; en (b) door immunoblotting met behulp van een anti-fosfo-eEF2 antilichaam. Voor beide worden reacties uitgevoerd in 20 μl totaal volume bevattende 50 mM HEPES (pH 7.5), 10 mM MgCl2, 1.5 mM CaCl2, 100 μg/ml calmoduline, 2 μM His-gelabeld eEF-2 en 400 nM GST-eEF-2 kinase, en ATP-mengsel [50 μM ATP met 1 μCi (γ-33P)ATP]. Het kinasemengsel zonder ATP wordt op ijs bereid en vervolgens 15 minuten bij kamertemperatuur voorgeïncubeerd. Kinase reacties worden gestart door ATP toe te voegen en gedurende 30 minuten bij 30°C te laten verlopen. Voor de filter-gebaseerde assay wordt de reactie beëindigd door 20 μl koude 1,5% fosforzuur toe te voegen, en 5 μl van de reactie wordt aangebracht op P81 Whatman fosfocellulose papier. Het papier wordt driemaal gewassen in 500 ml 0,5% fosforzuur en eenmaal met 200 ml aceton. Het papier wordt vervolgens aan de lucht gedroogd en ondergedompeld in 10 ml scintillatiemengsel. Radioactiviteit wordt geteld met behulp van een Beckton-Dickinson vloeistofscintillatieteller. Voor immunoblotting worden de reacties gestopt door toevoeging van 20 μl 3× Lamelli buffer [190 mM Tris (pH 6.8), 6% SDS, 30% glycerol, 15% 2-mercaptoethanol, en 0.003% broomfenolblauw kleurstof]. Monsters worden gedurende 5 minuten gekookt en gescheiden door 7% SDS-PAGE en verwerkt voor Western blotting zoals hieronder beschreven. Condities voor beide assays zijn gekozen om de lineariteit van de reactie met betrekking tot incubatietijd en enzymconcentratie te waarborgen.
In vivo
NH125 verlaagt de bloeddruk bij SHR en de ROS-productie, inductie van ontstekingsmoleculen en hypertrofie in de superieure mesenteriale slagader van SHR.
Referenties
  • [4] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23812389/

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, laat dan een bericht achter.

Voer uw naam in.
Voer uw e-mailadres in. Voer een geldig e-mailadres in.
Schrijf alstublieft iets voor ons.