Vedolizumab (anti-α4β7-integrin)

Vedolizumab (anti-α4β7-integrin) bindt aan een subset van humane perifere bloedgeheugen CD4⁺ T-lymfocyten, inclusief darm-homing interleukine 17 T-helperlymfocyten op het hoogste niveau, bindt ook aan eosinofielen op hoge niveaus, en aan naïeve T-helperlymfocyten, naïeve en geheugen cytotoxische T-lymfocyten, B-lymfocyten, natural killer-cellen en basofielen op lagere niveaus; Vedolizumab bindt aan geheugen CD4⁺ T- en B-lymfocyten met subnanomolaire potentie met een EC50 van 0,3-0,4 nM.[1]

PBMC's werden geresuspendeerd in assaybuffer voor intracellulaire kleuring van CD4-geheugencel-interleukine (IL) 17A. PBMC's werden gestimuleerd (of niet gestimuleerd, voor de controlesamples) met 50 ng/ml forbol 12-myristaat 13-acetaat en 1 µg/ml Ionomycin in aanwezigheid van 3 µM Monensin gedurende 5 uur bij 37°C. Na het wassen werden cellen gekleurd met fluorescent gelabelde antilichamen: Vedolizumab, anti-α4 en anti-β7, anti-CD4 en anti-CD45RO, waar van toepassing, bij 4°C gedurende 30 min. Cellen werden vervolgens gewassen met koud PBS en geresuspendeerd in fixatie- en permeabilisatie-werkoplossing kleuringsbuffer bij 4°C gedurende 30 min. Na fixatie en permeabilisatie werden cellen gewassen met permeabilisatiebuffer en geblokkeerd met 10% normaal ratten serum bij 4°C gedurende 10 min. Na de blokkeringsstap werden cellen gekleurd met fluorochroom-geconjugeerd anti_x0002_IL17A antilichaam bij 4°C gedurende 30 min. Tot slot werden cellen gewassen met permeabilisatiebuffer en geanalyseerd.