uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

KU-0063794 mTOR remmer

Name: KU-0063794
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S1226
Rating: 5 (77 reviews)

Cat.Nr.S1226

KU-0063794 is een potente en zeer specifieke duale-mTOR-remmer van mTORC1 en mTORC2 met een IC50 van ~10 nM in celvrije assays; geen effect op PI3K's.

KU-0063794 mTOR remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 465.54

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: Zuiverheid: 99.91%

99.91

Gerelateerde doelwitten	PI3K Akt GSK-3 ATM/ATR DNA-PK AMPK PDPK1 PTEN PP2A PDK
Overige mTOR Inhibitoren	Torin 1 Torin 2 AZD8055 Ridaforolimus (Deforolimus, MK-8669) Sapanisertib (MLN0128, INK-128) Torkinib (PP242) MHY1485 Vistusertib (AZD2014) OSI-027 WYE-354

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen	Assaytype	Concentratie	Incubatietijd	Formulering	Activiteitsbeschrijving	PMID
HepG2	Cell Viability Assay	0.1–50 μM	72 h		decreases cell viability in a dose dependent manner	26278819
HepG2	Colony Formation Assay	1–50 μM	10 d		decreases the number of viable HepG2 colonies significantly	26278819
HepG2	Apoptosis Assay	0.1–50 μM	48 h		induces apoptosis in a dose dependent manner	26278819
HepG2	Function Assay	5/10 μM	24 h		dramatically inhibits phosphorylation of AKT at Ser-473	26278819
HepG2	Function Assay	5/10 μM	24 h		downregulates the levels HIF1α and cyclin D1	26278819
HepG2	Function Assay	0.1–50 μM	24 h		induces p62 downregulation, Beclin-1 expression and LC3B-I to LC3B-II conversion in a dose dependent manner	26278819
HepG3	Function Assay	0.1–50 μM	48 h		induces cell autophagy in a dose dependent manner	26278819
AGS	Growth Inhibition Assay				IC50=15.0 ± 2.91 μM	24597478
HGC27	Growth Inhibition Assay				IC50=15.0 ± 4.82 μM	24597478
MKN45	Growth Inhibition Assay				IC50=0.82 ± 0.01 μM	24597478
NUGC4	Growth Inhibition Assay				IC50=2.93 ± 0.31 μM	24597478
PC9	Growth Inhibition Assay		72 h		IC50=10.15±0.62 nM	23874880
PC9GR	Growth Inhibition Assay		72 h		IC50=6.21±1.30 nM	23874880
H1650	Growth Inhibition Assay		72 h		IC50=7.61±0.62 nM	23874880
H1975	Growth Inhibition Assay		72 h		IC50=11.15±0.93 nM	23874880
PC9	Function Assay	10.15 nM	72 h		inhibits mTOR phosphorylation status	23874880
PC9GR	Function Assay	6.21 nM	72 h		inhibits mTOR phosphorylation status	23874880
H1650	Function Assay	7.61 nM	72 h		inhibits mTOR phosphorylation status	23874880
H1975	Function Assay	11.15 nM	72 h		inhibits mTOR phosphorylation status	23874880
PC9	Function Assay	10.15 nM	72 h		inhibits phosphorylation of p70S6K	23874880
PC9GR	Function Assay	6.21 nM	72 h		inhibits phosphorylation of p70S6K	23874880
H1650	Function Assay	7.61 nM	72 h		inhibits phosphorylation of p70S6K	23874880
H1975	Function Assay	11.15 nM	72 h		inhibits phosphorylation of p70S6K	23874880
LNCaP	Cell Viability Assay	0-10 μM	24 h		decreases cell viability in a dose dependent manner	23840605
PC-3	Cell Viability Assay	0-10 μM	24 h		decreases cell viability in a dose dependent manner	23840605
MDA-MB-468	Cell Viability Assay	0-10 μM	24 h		decreases cell viability in a dose dependent manner	23840605
LNCaP	Function Assay	200–800 nM	24 h		decreases the phosphorylation level of p70S6K in a dose dependent manner	23840605
PC-3	Function Assay	200–800 nM	24 h		decreases the phosphorylation level of p70S6K in a dose dependent manner	23840605
MDA-MB-468	Function Assay	200–800 nM	24 h		decreases the phosphorylation level of p70S6K in a dose dependent manner	23840605
Caki-1	Function Assay	100-2000 nM	10-180 min	DMSO	inhibits both mTORC1 and mTORC2 as indicated by the decrease in phosphorylation of downstream effectors	23349989
786-O	Function Assay	100-2000 nM	10-180 min	DMSO	inhibits both mTORC1 and mTORC2 as indicated by the decrease in phosphorylation of downstream effectors	23349989
Caki-1	Cell Viability Assay	300-4000 nM	24-96 h	DMSO	suppresses the cell viability in both time and dose dependent manner	23349989
786-O	Cell Viability Assay	300-4000 nM	24-96 h	DMSO	suppresses the cell viability in both time and dose dependent manner	23349989
Caki-1	Function Assay	2 µM	72 h	DMSO	induces G1 cell cycle arrest and autophagy	23349989
786-O	Function Assay	2 µM	72 h	DMSO	induces G1 cell cycle arrest and autophagy	23349989
HEK293	Function assay		2 hrs		Inhibition of recombinant FLAG-tagged mTOR expressed in HEK293 cells using biotinylated p70S6K substrate after 2 hrs by alphascreen competition assay, IC50=0.003μM	19762236
HBCx-10	Function assay	5 mg/kg			Potentiation of irinotecan-induced tumor regression against human HBCx-10 cells xenografted in immunocompromised mouse at 5 mg/kg, po qd administered on days 1 to 3 of weekly cycle	19762236
U87MG	Function assay		2 hrs		Inhibition of mTORC1 in human U87MG cells assessed as phosphorylated S6 ribosomal protein (Ser235/236) level after 2 hrs by Western blotting, IC50=0.1μM	19762236
U87MG	Function assay		2 hrs		Inhibition of mTORC2 in human U87MG cells assessed as phosphorylated AKT (Ser473) level after 2 hrs by Western blotting, IC50=0.15μM	19762236
T47D	Antiproliferative assay		120 hrs		Antiproliferative activity against human T47D cells after 120 hrs by SRB assay, GI50=0.35μM	19762236
HEK293	Function assay				Inhibition of recombinant FLAG-tagged mTOR (1362 to 2549) (unknown origin) expressed in HEK293 cells, IC50=0.0025μM	23375793
MDA-MB-468	Function assay		2 hrs		Inhibition of mTORC2 in human MDA-MB-468 cells assessed as reduction of AKT phosphorylation at Ser473 after 2 hrs, IC50=0.24μM	23375793
MDA-MB-468	Function assay		2 hrs		Inhibition of mTORC1 in human MDA-MB-468 cells assessed as reduction of pS6 phosphorylation at Ser235/236 after 2 hrs, IC50=0.66μM	23375793
HEK293	Function assay		30 mins		Inhibition of mTORC1 in HEK293 cells using GST-tagged S6K1 or Akt1 as substrate after 30 mins by immunoblotting assay, IC50=0.01μM	29211480
PC3	Function assay	100 mg/kg			Inhibition of Akt phosphorylation at Ser473 in PTEN-deficient human PC3 cells xenograft mouse model at 100 mg/kg, po single dose measured up to 8 hrs	29211480
PC3	Antitumor assay	30 mg/kg			Antitumor activity against human PC3 cells xenograft mouse model assessed as inhibition of tumor growth at 30 mg/kg, po bid in presence of 1-aminobenzotriazole	29211480
PC3	Antitumor assay	60 mg/kg			Antitumor activity against human PC3 cells xenograft mouse model assessed as inhibition of tumor growth at 60 mg/kg, po bid in presence of 1-aminobenzotriazole	29211480
HEK293	Function assay		30 mins		Inhibition of mTORC2 in HEK293 cells using GST-tagged S6K1 or Akt1 as substrate after 30 mins by immunoblotting assay, IC50=0.01μM	29211480
SW620	Function assay	20 mg/kg			Potentiation of irinotecan-induced tumor regression against human SW620 cells xenografted in immunocompromised mouse at 20 mg/kg, po qd administered on days 2 to 4 of weekly cycle	29211480
SJ-GBM2	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SJ-GBM2 cells	29435139
A673	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for A673 cells	29435139
SK-N-MC	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for SK-N-MC cells	29435139
BT-37	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for BT-37 cells	29435139
NB-EBc1	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for NB-EBc1 cells	29435139
OHS-50	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for OHS-50 cells	29435139
MG 63 (6-TG R)	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for MG 63 (6-TG R) cells	29435139
Rh41	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Primary screen for Rh41 cells	29435139
A673	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for A673 cells)	29435139
BT-12	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for BT-12 cells	29435139
DAOY	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for DAOY cells	29435139
SJ-GBM2	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SJ-GBM2 cells	29435139
U-2 OS	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for U-2 OS cells	29435139
Rh41	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh41 cells	29435139
RD	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for RD cells	29435139
Rh18	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh18 cells	29435139
Rh30	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for Rh30 cells	29435139
SK-N-SH	qHTS assay				qHTS of pediatric cancer cell lines to identify multiple opportunities for drug repurposing: Confirmatory screen for SK-N-SH cells	29435139
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht	465.54	Formule	C₂₅H₃₁N₅O₄	Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)	3 jaar-20°Cpoeder
CAS-nr.	938440-64-3	SDF downloaden		Opslag van stamoplossingen	1 jaar-80°Cin oplosmiddel 1 maand-20°Cin oplosmiddel
Synoniemen	N/A			Smiles	CC1CN(CC(O1)C)C2=NC3=C(C=CC(=N3)C4=CC(=C(C=C4)OC)CO)C(=N2)N5CCOCC5

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 16 mg/mL (34.36 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 5 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa	Concentratie	Volume	Moleculair gewicht
=	×	×

Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo Batch:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	30%PEG400 1 0.5%Tween80 2 5%propylene glycol Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor aangepaste tests.	30.000mg/ml (64.44mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 300 μL of 100 mg/ml clarified PEG400 stock solution to 5 μL of Tween80, mix evenly to clarify it; add 50 μL Propylene glycol to the above system, mix evenly to clarify it; then continue to add 645 μL ddH2O to adjust the volume. to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

Dosering: mg/kg Gemiddeld gewicht van dieren: g Doseervolume per dier:μL Aantal dieren:

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH₂O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Targets/IC₅₀/Ki	mTORC1 (Cell-free assay) ~10 nM mTORC2 (Cell-free assay) ~10 nM
In vitro	In vergelijking met de mTOR-remmer PP242 vertoont KU-0063794 een hogere specificiteit voor mTOR, aangezien het inactief is tegen PI3K's of 76 andere kinasen. In HEK-293-cellen is 30 nM van deze verbinding voldoende om de S6K1-activiteit snel te ableren door de fosforylering van het hydrofobe motief (Thr³⁸⁹) en vervolgens de fosforylering van het T-lusresidu (Thr²²⁹) te blokkeren. In het geval van IGF1-stimulatie van serum-uitgehongerde HEK-293-cellen is 300 nM van deze verbinding nodig om de S6K1-activiteit met ~90% te remmen. Deze chemische stof bij 100-300 nM remt ook volledig de aminozuur-geïnduceerde fosforylering van S6K1 en S6-eiwit. Net als S6K1 remt het de fosforylering van mTORC1 bij Ser²⁴⁴⁸ en mTORC2 bij Ser²⁴⁸¹ op een dosisafhankelijke en tijdsafhankelijke manier. In aanwezigheid van serum of na IGF1-stimulatie induceert deze verbinding een dosisafhankelijke remming van de activiteit en fosforylering van Akt bij Ser⁴⁷³ en onverwachte Thr³⁰⁸, evenals de fosforylering van de Akt-substraten PRAS40 bij Thr²⁴⁶, GSK3α/GSK3β bij Ser²¹/Ser⁹ en Foxo-1/3a bij Thr²⁴/Thr³². Deze verbinding, maar niet rapamycine, remt de SGK1-activiteit en Ser⁴²²-fosforylering, evenals het fysiologische substraat NDGR1 op een dosisafhankelijke manier, in dezelfde mate als S6K1- en Akt-fosforylering, terwijl het de door forbolester geïnduceerde ERK- of RSK-fosforylering en RSK-activering niet remt. Vergeleken met rapamycine vertoont deze chemische stof een significantere potentie om de volledige defosforylering van 4E-BP1 bij Thr³⁷, Thr⁴⁶ en Ser⁶⁵ te induceren. Het remt de celgroei van zowel wild-type als mLST8-deficiënte MEF's en induceert een G1-celcyclusarrest, significant meer dan rapamycine.
Kinase Assay	mTOR-complexen kinase-assays
Kinase Assay	HEK-293-cellen worden vers gelyseerd in Hepes-lysisbuffer. Lysaat (1-4 mg) wordt voorgezuiverd door incubatie met 5-20 μL Protein G-Sepharose geconjugeerd aan pre-immuun IgG. De lysaat-extracten worden vervolgens geïncubeerd met 5-20 μL Protein G-Sepharose geconjugeerd aan 5-20 μg van ofwel anti-Rictor of anti-Raptor antilichaam, of pre-immuun IgG. Alle antilichamen zijn covalent geconjugeerd aan Protein G-Sepharose. Immunoprecipitaties worden gedurende 1 uur bij 4 °C uitgevoerd op een trillend platform. De immunoprecipitaten worden vier keer gewassen met Hepes-lysisbuffer, gevolgd door twee wasbeurten met Hepes-kinasebuffer. Voor Raptor-immunoprecipitaten die worden gebruikt voor het fosforyleren van S6K1, bevat de buffer voor de eerste twee wasstappen 0,5 M NaCl om optimale kinase-activiteit te garanderen. GST-Akt1 wordt geïsoleerd uit serum-gedepriveerde HEK-293-cellen geïncubeerd met PI-103 (1 μM gedurende 1 uur). GST-S6K1 wordt gezuiverd uit serum-gedepriveerde HEK-293-cellen geïncubeerd met rapamycine (0,1 μM gedurende 1 uur). mTOR-reacties worden geïnitieerd door toevoeging van 0,1 mM ATP en 10 mM MgCl₂ in aanwezigheid van verschillende concentraties KU-0063794 en GST-Akt1 (0,5 μg) of GST-S6K1 (0,5 μg). De reacties worden gedurende 30 minuten bij 30 °C uitgevoerd op een trillend platform en gestopt door toevoeging van SDS-monsterbuffer. Reactiemengsels worden vervolgens gefilterd door een 0,22-μm-poresize Spin-X-filter en monsters worden onderworpen aan elektroforese en immunoblot-analyse met de aangegeven antilichamen.
In vivo	Ku0063794 remt tumorgroei en mTOR-signalering in een preklinisch model voor niercelcarcinoom. Deze verbinding was echter niet effectiever in de dierstudie. Een mogelijke verklaring voor het gebrek aan grotere activiteit in vivo voor deze chemische stof.
Referenties	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19402821/ [2] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23349989/

Toepassingen

Methoden	Biomarkers	Afbeeldingen	PMID
Western blot	p-mTOR p-S6K / S6K / p-4E-BP1 / E7 / E6 / p53		24262658

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, kunt u een bericht achterlaten.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):