uitsluitend voor onderzoeksdoeleinden

UNC1999 Histone Methyltransferase remmer

Name: UNC1999
Brand: Selleck Chemicals
SKU: S7165
Rating: 5 (32 reviews)

Cat.Nr.S7165

UNC1999 is een potente, oraal biologisch beschikbare en selectieve remmer van EZH2 en EZH1 met een IC50 van respectievelijk 2 nM en 45 nM in celvrije testen, wat een >1000-voudige selectiviteit toont over een breed scala aan epigenetische en niet-epigenetische doelwitten. Deze verbinding is een potente autophagy-inductor. Het onderdrukt specifiek H3K27me3/2 en induceert een reeks anti-leukemische effecten, waaronder antiproliferatie, differentiatie en apoptosis.

UNC1999 Histone Methyltransferase remmer Chemical Structure

Chemische structuur

Moleculair gewicht: 569.74

Ga naar

Kwaliteitscontrole

Batch: Zuiverheid: 99.86%

99.86

Gerelateerde doelwitten	HDAC JAK BET PKC PARP HIF PRMT EZH2 AMPK Histone Acetyltransferase
Overige Histone Methyltransferase Inhibitoren	Pinometostat (EPZ5676) 3-Deazaneplanocin A (DZNep) Hydrochloride BIX-01294 trihydrochloride EPZ015666 (GSK3235025) EPZ004777 MM-102 (HMTase Inhibitor IX) Chaetocin SGC 0946 EPZ005687 UNC0638

Celkweek, behandeling & werkconcentratie

Cellijnen	Assaytype	Incubatietijd	Activiteitsbeschrijving	PMID
human MCF10A cells	Function assay	72 h	Inhibition of EZH2 in human MCF10A cells assessed as reduction of H3K27me3 level after 72 hrs by Western blot analysis, IC50=0.124 μM	25406853
human MCF10A cells	Cytotoxic assay		Cytotoxicity against human MCF10A cells assessed as cell viability by Alamar Blue assay, EC50=19.2 μM	25406853
Klik om meer experimentele gegevens over de cellijn te bekijken

Chemische informatie, Opslag en Stabiliteit

Moleculair gewicht	569.74	Formule	C₃₃H₄₃N₇O₂	Opslag (Vanaf de ontvangstdatum)	3 jaar-20°Cpoeder
CAS-nr.	1431612-23-5	SDF downloaden		Opslag van stamoplossingen	1 jaar-80°Cin oplosmiddel 1 maand-20°Cin oplosmiddel
Synoniemen	N/A			Smiles	CCCC1=C(C(=O)NC(=C1)C)CNC(=O)C2=C3C=NN(C3=CC(=C2)C4=CN=C(C=C4)N5CCN(CC5)C(C)C)C(C)C

Oplosbaarheid

In vitro
Batch:

DMSO : 100 mg/mL (175.51 mM)
(Met vocht verontreinigde DMSO kan de oplosbaarheid verminderen. Gebruik verse, watervrije DMSO.)

Ethanol : 100 mg/mL

Water : Insoluble

Molariteitscalculator

Massa	Concentratie	Volume	Moleculair gewicht
=	×	×

Verdunningscalculator Moleculair gewicht calculator

In vivo Batch:
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor aangepaste tests.	5.000mg/ml (8.78mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor aangepaste tests.	1.250mg/ml (2.19mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 25 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

In vivo Formuleringscalculator (Heldere oplossing)

Stap 1: Voer de onderstaande informatie in (Aanbevolen: Een extra dier voor het geval van verlies tijdens het experiment)

Dosering: mg/kg Gemiddeld gewicht van dieren: g Doseervolume per dier:μL Aantal dieren:

Stap 2: Voer de in vivo formulering in (Dit is alleen de calculator, geen formulering. Neem eerst contact met ons op als er geen in vivo formulering is in het gedeelte Oplosbaarheid.)

% DMSO + % + % Tween 80 + % ddH₂O

%DMSO+ %

Berekeningsresultaten:

Werkconcentratie: mg/ml;

Methode voor het bereiden van DMSO-mastervloeistof: mg geneesmiddel vooraf opgelost in μL DMSO ( Concentratie mastervloeistof mg/mL, Neem eerst contact met ons op als de concentratie de DMSO-oplosbaarheid van de partij geneesmiddel overschrijdt. )

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toeμL PEG300, mengen en helder maken, voeg vervolgens toeμL Tween 80, mengen en helder maken, voeg vervolgens toe μL ddH₂O, mengen en helder maken.

Methode voor het bereiden van in vivo formulering: Neem μL DMSO mastervloeistof, voeg vervolgens toe μL Maïsolie, mengen en helder maken.

Opmerking: 1. Zorg ervoor dat de vloeistof helder is voordat u het volgende oplosmiddel toevoegt.
2. Zorg ervoor dat u het/de oplosmiddel(en) in de juiste volgorde toevoegt. U moet ervoor zorgen dat de verkregen oplossing, bij de vorige toevoeging, een heldere oplossing is voordat u verdergaat met het toevoegen van het volgende oplosmiddel. Fysische methoden zoals vortexen, echografie of een warmwaterbad kunnen worden gebruikt om het oplossen te bevorderen.

Werkingsmechanisme

Kenmerken	The first orally bioavailable inhibitor against wild-type and mutant EZH2 as well as EZH1.
Targets/IC₅₀/Ki	EZH2 (Cell-free assay) 2 nM EZH1 (Cell-free assay) 45 nM
In vitro	UNC1999 is in vitro zeer potent voor zowel EZH2 Y641N als EZH2 Y641F mutanten. Deze verbinding veroorzaakt concentratieafhankelijke reducties van H3K27me3 in MCF10A-cellen met een IC50 van 124 nM, terwijl het een lage cellulaire toxiciteit vertoont. Het vertoont een potente, concentratieafhankelijke remming van celproliferatie met een EC50 van 633 nM in een DLBCL-cellijn die de EZH2Y641N-mutant herbergt. Bovendien verrijkt gebiotinyleerde UNC1999 EZH2 uit HEK293T-celysaten, en kan dus worden gebruikt in chemoproteomische studies.
Kinase Assay	Scintillatie Proximity Assay
Kinase Assay	Methyltransferase-activiteitstesten worden uitgevoerd door de incorporatie van tritiumgelabelde methylgroepen van S-adenosylmethionine (3H-SAM) in gebiotinyleerde peptidesubstraten te monitoren met behulp van Scintillation Proximity Assay (SPA) voor het PRC2-EZH2 trimerische complex (EZH2:EED:SUZ12), PRC2-EZH1 pentamerische complex (EZH1:EED:SUZ12:RBBP4:AEBP2), SETD7, G9a, GLP, SETDB1, SETD8, SUV420H1, SUV420H2, SUV39H2, MLL1 tetramerische complex (MLL:WDR5:RbBP5:ASH2L), PRMT1, PRMT3, PRMT5-MEP50 complex en SMYD2. De reactiebuffer voor SMYD2 en SMYD3 is 50 mM Tris pH 9.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100; voor G9a, GLP en SUV39H2 is 25 mM kaliumfosfaat pH 8.0, 1 mM EDTA, 2 mM MgCl₂ en 0.01% Triton X-100; en voor andere HMT's 20 mM Tris pH 8.0, 5 mM DTT, 0.01% TritonX-100. Om de enzymatische reacties te stoppen, wordt 10 μL van 7.5 M guanidinehydrochloride toegevoegd, gevolgd door 180 μL buffer, gemengd en overgebracht naar een 384-wells FlashPlate. Na het mengen worden de reactiemengsels geïncubeerd en worden de CPM-tellingen gemeten met behulp van een Topcount plaatlezer. De CPM-tellingen in afwezigheid van deze verbinding voor elke dataset worden gedefinieerd als 100% activiteit. In afwezigheid van het enzym worden de CPM-tellingen in elke dataset gedefinieerd als achtergrond (0%). IC50-waarden worden bepaald met behulp van compoundconcentraties variërend van 100 nM tot 100 μM. De IC50-waarden worden bepaald met behulp van SigmaPlot-software. EZH2-Y641F-testen worden uitgevoerd met 30 nM enzym in 20 mM Tris pH 8, 5 mM DTT, 0.01% Triton X-100, 5 μM SAM en 1 μM H3 (1-24) peptide (hetzelfde als voor het wild-type PRC2-EZH2-complex). Voor DNMT1 wordt de test uitgevoerd met hemigemethyleerd dsDNA als substraat. Het dsDNA-substraat wordt bereid door twee complementaire strengen (gebiotinyleerde voorwaartse streng: BGAGCCCGTAAGCCCGTTCAGGTCG en omgekeerde streng: CGACCTGAACGGGCTTACGGGCTC), gesynthetiseerd door Eurofins MWG Operon, te hybridiseren. De reactiebuffer is 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5 mM DTT, 0.01% Triton X-100. Methyltransferase-activiteitstesten voor DOT1L worden uitgevoerd met filterplaten. Reactiemengsels in 20 mM Tris-HCl, pH 8.0, 5 mM DTT, 2 mM MgCl₂ en 0.01% Triton X-100 worden 1 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd, 100 μL 10% TCA wordt toegevoegd, gemengd en overgebracht naar een filterplaat. Platen worden gecentrifugeerd bij 2000 tpm gedurende 2 minuten, gevolgd door 2 extra wasbeurten met 10% TCA en één ethanolwas (180 μL), gevolgd door centrifugatie. Platen worden gedroogd en 100 μL MicroO wordt toegevoegd en gecentrifugeerd. 70 μL MicroO wordt toegevoegd en CPM wordt gemeten met behulp van een Topcount plaatlezer.
In vivo	Behandeling met UNC1999 (150 en 50 mg/kg, i.p.) resulteert in plasmaconcentraties van deze verbinding boven de cellulaire IC50 gedurende 24 uur in vivo. Bovendien is het ook oraal biologisch beschikbaar bij muizen, wat chronische dierstudies praktischer en handiger maakt.
Referenties	[1] https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23614352/ [2] http://www.thesgc.org/chemical-probes/UNC1999

Toepassingen

Methoden	Biomarkers	PMID
Western blot	H3K27Me3 / Cleaved PARP / LC3B H3K27me2 / H3K27me1 / H3K27ac / H3K4me3 / H3K9me2 / H3K36me2	27449082
Immunofluorescence	EZH2 / H3K27me3 NF-κB	23614352
Growth inhibition assay	Cell viability	27449082

Technische ondersteuning

Gebruiksaanwijzing

Tel: +1-832-582-8158 Ext:3

Als u nog andere vragen heeft, kunt u een bericht achterlaten.

C1=C0/X	C1:	LOG(C1):
C2=C1/X	C2:	LOG(C2):
C3=C2/X	C3:	LOG(C3):
C4=C3/X	C4:	LOG(C4):
C5=C4/X	C5:	LOG(C5):
C6=C5/X	C6:	LOG(C6):
C7=C6/X	C7:	LOG(C7):
C8=C7/X	C8:	LOG(C8):