|
Hoe te citeren 1. Voor in-tekst citatie (materialen en methoden): 2. Voor de tabel met belangrijke bronnen: |
||
|
Gratis nummer: (877) 796-6397 -- Alleen VS en Canada -- |
Fax: +1-832-582-8590 Bestellingen: +1-832-582-8158 |
Technische ondersteuning: +1-832-582-8158 Ext:3 Vermeld uw bestelnummer in de e-mail. Wij streven ernaar alle e-mailvragen binnen één werkdag te beantwoorden. |
Biologische Beschrijving
| Specificiteit | UNC5B Antibody [H5N21] detecteert endogene niveaus van totaal UNC5B-eiwit. |
|---|---|
| Achtergrond | UNC5B, een afhankelijkheidsreceptor van de UNC5-familie die betrokken is bij netrin-1-gemedieerde afstoting tijdens axongeleiding en vasculaire ontwikkeling, wordt gekenmerkt door twee extracellulaire Ig-achtige domeinen (Ig1-2) en twee thrombospondine type 1 repeats (TSP1) die de netrin-1-binding mediëren, een proces dat verder wordt verbeterd door heparaansulfaten. Het bezit een enkele transmembraanhelix en een cytoplasmatisch gebied dat ZU5-, UPA- en doodsdomeinen (DD) bevat, waarbij caspase-3 splitst bij DLVD↓N (Asp931) om het pro-apoptotische intracellulaire domein (ICD) vrij te geven, met residuen zoals Phe601 in UPA die de autoinhiberende, gesloten conformatie stabiliseren. Bij afwezigheid van netrin-1 nemen UNC5B-homodimeren een open cytosole staat aan waarin het DD DAPK1 rekruteert na de defosforylering ervan op Ser308, waardoor de kinase wordt geactiveerd en p53/Bax/caspase-9-afhankelijke apoptose wordt gestimuleerd; tegelijkertijd exposeren UNC5B-DCC-heterodimeren het P1-domein van DCC, wat leidt tot repulsieve signalering via Rac1/Cdc42-inhibitie en PAK/LIMK/cofilin-gemedieerde instorting van F-actine-uitsteeksels, waardoor overtollige axonen of vasculaire tipcel-filopodia worden gesnoeid. Bij netrin-1-binding worden gesloten ZU5-UPA-interacties gestabiliseerd, waardoor DAPK1-toegang wordt geblokkeerd en de signalering verschuift naar pro-angiogene PI3K/Akt-overlevingsroutes naast continue repulsieve cytoskeletale modulatie. Overwegend tot expressie gebracht in endotheel- en neurale weefsels, is UNC5B-gemedieerd snoeien essentieel voor de verfijning van circuits van het centrale en perifere zenuwstelsel en vasculaire patroonvorming, terwijl de splice-isoform UNC5B-Δ8 (gegenereerd door NOVA2-gemedieerde exon 8-skipping) constitutieve, netrin-1-ongevoelige apoptose bevordert om tipcelcompetitie te garanderen. Epigenetische silencing of oncogene mutaties van UNC5B, frequent bij colorectale kanker, verstoren het evenwicht tussen afstoting en overleving, wat tumorangiogenese, metastase en een slechte prognose aanwakkert. |
Gebruiksinformatie
| Toepassing | IF | Verdunning |
|
||
|---|---|---|---|---|---|
| Reactiviteit | Human | ||||
| Bron | Mouse Monoclonal Antibody | MW | |||
| Opslagbuffer | PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3 | Opslag (Vanaf de datum van ontvangst) |
-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years | ||
| IF |
Experimental Protocol:
Sample Preparation
1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.
2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.
3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.
4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.
Fixation
1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.
2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Permeabilization
1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.
(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)
Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.
Blocking
Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)
Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.
Immunofluorescence Staining (Day 1)
1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.
2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.
Immunofluorescence Staining (Day 2)
1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.
3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.
5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.
Mounting
1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.
2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.
3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.
|
Referenties
|