T0070907

T0070907 is een potente en selectieve PPARγ-antagonist. Met een schijnbare bindingsaffiniteit van 1 nM modificeert deze verbinding covalent PPARγ op cysteïne 313 in helix 3 van menselijk PPARγ2. Het blokkeert de PPARγ-functie in zowel celgebaseerde reportergen- als adipocytendifferentiatieassays. In overeenstemming met zijn rol als antagonist van PPARγ, blokkeert deze chemische stof agonist-geïnduceerde rekrutering van coactivator-afgeleide peptiden naar PPARγ in een homogene tijd-opgeloste fluorescentie-gebaseerde assay en bevordert het de rekrutering van de transcriptionele corepressor NCoR naar PPARγ in zowel glutathion S-transferase pull-down assays als een PPARγ/retinoïde X-receptor (RXR) α-afhankelijke gel shift assay. Studies met mutante receptoren suggereren dat het de interactie van PPARγ met deze cofactorproteïnen moduleert door de conformatie van helix 12 van het PPARγ-ligandbindingsdomein te beïnvloeden. Interessant genoeg, terwijl de T0070907-geïnduceerde NCoR-rekrutering naar het PPARγ/RXRα-heterodimeer bijna volledig kan worden omgekeerd door de gelijktijdige behandeling met RXRα-agonist LGD1069, heeft deze verbindingbehandeling slechts bescheiden effecten op de LGD1069-geïnduceerde coactivatorrekrutering naar het PPARγ/RXRα-heterodimeer. [1] Deze chemische behandeling remt proliferatie, invasie en migratie, maar heeft geen significant effect op apoptose. Moleculaire remming met behulp van een dominant negatieve (Δ462) receptor levert vergelijkbare resultaten op. Het medieert ook een dosisafhankelijke afname van de fosforylering van PPARγ en het vermogen ervan om aan DNA te binden, en kan direct de mitogeen-geactiveerde proteïnekinase-signalering beïnvloeden. [2]

Lipopolysaccharide-preconditionering vermindert significant de ontwikkeling van nierdisfunctie, hepatocellulaire schade en circulatiestoornissen, evenals de toename van de plasmaniveaus van interleukine-1 [bèta] veroorzaakt door ernstige endotoxemie. Dit compound kan al deze gunstige effecten die worden geboden door preconditionering met lipopolysaccharide verminderen [3]

• Ligandbindingstest

  Om de bindingsaffiniteit van T0070907 voor de PPAR's te bepalen, wordt een scintillatieproximiteitsassay (SPA) uitgevoerd met de volgende modificaties. Een reactie van 90 μl bevat SPA-buffer (10 mM KH₂PO₄, 10 mM KH₂PO₄, 2 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM dithiothreitol, 2 mM CHAPS, 10% (v/v) glycerol, pH 7,1), 50 ng GST-PPARγ (of 150 ng GST-PPARα, GST-PPARδ), 5 nM ³H-gelabelde radioliganden en 5 μl van deze verbinding in Me₂SO. Na incubatie gedurende 1 uur bij kamertemperatuur worden 10 μl met polylysine gecoate SPA-parels (bij 20 mg/ml in SPA-buffer) toegevoegd, en het mengsel wordt 1 uur geïncubeerd alvorens te lezen in Packard Topcount.

• Cellijnen

  MCF-7 cells

• Concentraties

  20 μM and higher concentrations

• Incubatietijd

  48 h

• Methode

  MTS assay

• Dierlijke modellen

  Preconditioning is performed by administering a low dose (1 mg/kg) of Escherichia coli LPS (serotype 0.127:B8) intraperitoneally 24 hr before the induction of severe endotoxemia.

• Doseringen

  1 mg/kg

• Toediening

  intraperitoneally