SP-96

CatalogusnummerS9658 Batch:S965801

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₂₅H₂₀FN₇O

Moleculair gewicht

453.47

CAS-nr.

2682114-54-9

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

DMSO

91 mg/mL (200.67 mM)

Ethanol

2 mg/mL (4.41 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Homogeneous suspension

CMC-NA

≥5mg/ml

Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

SP-96 is een krachtige, selectieve en niet-ATP-competitieve remmer van Aurora B met een IC50 van 0,316 nM. Deze verbinding kan worden gebruikt voor onderzoek naar triple-negatieve borstkanker (TNBC).

Doelen

Aurora B
(Cell-free assay)

0.316 nM

In vitro

SP-96 vertoont sub-nanomolaire potentie in Aurora B enzymatische assays (IC50 = 0,316 ± 0,031 nM). Deze verbinding vertoont >2000-voudige selectiviteit tegen FLT3 en KIT, wat belangrijk is voor normale hematopoiese. De enzymkinetiek van deze remmer toont niet-ATP-competitieve inhibitie, wat het een 'first-in-class' remmer maakt. Het toont selectieve groeiremming in NCI60-screening, inclusief remming van MDA-MD-468, een Triple Negative Breast Cancer cellijn.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	Aurora Kinase B enzymatische assay De kinase-inhibitie-assay wordt uitgevoerd door het meten van kinase-activiteit in een microfluïdische assay. De scheiding van een gefosforyleerd product van het substraat wordt gemonitord. De assay wordt uitgevoerd met behulp van een 12-sipper chip op een Caliper EZ Reader II. Het recept dat wordt gebruikt voor de scheidingsbuffer is 100 mM HEPES, 10 mM EDTA, 0,015% Brij-35, 0,1% CR-3. De voorraadoplossingen van het compound (20 mM in DMSO) worden verdund in kinasebuffer. 1 μL van de gewenste voorraadoplossing wordt overgebracht naar een 384-wells microtiter-assayplaat. Het Aurora B-enzym wordt in kinasebuffer verdund tot een concentratie van 2 nM. 5 μL van het enzymmengsel wordt overgebracht naar de assayplaat. De remmers/Aurora B-enzym worden 60 minuten geïncubeerd met licht schudden. Een substraatmix wordt bereid die ATP en 5FAM-getagd peptide bevat, opgelost in de hierboven beschreven kinasebuffer. 5 μL van de substraatoplossing wordt toegevoegd aan de assayplaat. De werkconcentraties zijn als volgt: peptide (1,5 μM), ATP (190 μM) en dit compound in 12-punts ½log verdunningen (0,2 mM-0,632 nM). Voor de positieve controle wordt geen remmer toegevoegd, en voor de negatieve controle wordt geen enzym toegevoegd. Voor de loopcontrole wordt barasertib gebruikt. Het percentage inhibitie wordt gemeten door het startpeptide te vergelijken met de gefosforyleerde productpieken.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen MCF-7 cells Concentraties -- Incubatietijd 24 h Methode The growth inhibition of 60 cell lines is obtained by submitting the compound to National Cancer Institute’s NCI60 panel. MCF-7 cells are cultured in RPMI-1640 medium with 5% FBS in an incubator maintained at 37 ℃ and 5% CO2. The media is changed on alternate days. After reaching confluency, the media is aspirated, cells are washed with PBS, detached using 0.25% trypsin and centrifuged. The collected cells are seeded in 96-well microtiter plates at a density of 5000 cells/well. The cells are allowed to adhere to plate overnight. The test compounds, vehicle control and positive controls are added 24 h after the cells are plated and allowed to incubate. Following 24 h of incubation, the media is aspirated, and the cells are washed with PBS. 40 mL of the media and 10 mL of 5 mg/mL of MTT solution prepared in PBS is added to the cells and incubated for 4 h at 37 ℃ and 5% CO2. After incubation, 150 mL of DMSO is added to each well and the cell viability is measured at 570 nM by an ELISA plate reader.

Kinase-assay:^{^[1]}

Aurora Kinase B enzymatische assay
De kinase-inhibitie-assay wordt uitgevoerd door het meten van kinase-activiteit in een microfluïdische assay. De scheiding van een gefosforyleerd product van het substraat wordt gemonitord. De assay wordt uitgevoerd met behulp van een 12-sipper chip op een Caliper EZ Reader II. Het recept dat wordt gebruikt voor de scheidingsbuffer is 100 mM HEPES, 10 mM EDTA, 0,015% Brij-35, 0,1% CR-3. De voorraadoplossingen van het compound (20 mM in DMSO) worden verdund in kinasebuffer. 1 μL van de gewenste voorraadoplossing wordt overgebracht naar een 384-wells microtiter-assayplaat. Het Aurora B-enzym wordt in kinasebuffer verdund tot een concentratie van 2 nM. 5 μL van het enzymmengsel wordt overgebracht naar de assayplaat. De remmers/Aurora B-enzym worden 60 minuten geïncubeerd met licht schudden. Een substraatmix wordt bereid die ATP en 5FAM-getagd peptide bevat, opgelost in de hierboven beschreven kinasebuffer. 5 μL van de substraatoplossing wordt toegevoegd aan de assayplaat. De werkconcentraties zijn als volgt: peptide (1,5 μM), ATP (190 μM) en dit compound in 12-punts ½log verdunningen (0,2 mM-0,632 nM). Voor de positieve controle wordt geen remmer toegevoegd, en voor de negatieve controle wordt geen enzym toegevoegd. Voor de loopcontrole wordt barasertib gebruikt. Het percentage inhibitie wordt gemeten door het startpeptide te vergelijken met de gefosforyleerde productpieken.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
MCF-7 cells
Concentraties
--
Incubatietijd
24 h
Methode
The growth inhibition of 60 cell lines is obtained by submitting the compound to National Cancer Institute’s NCI60 panel. MCF-7 cells are cultured in RPMI-1640 medium with 5% FBS in an incubator maintained at 37 ℃ and 5% CO2. The media is changed on alternate days. After reaching confluency, the media is aspirated, cells are washed with PBS, detached using 0.25% trypsin and centrifuged. The collected cells are seeded in 96-well microtiter plates at a density of 5000 cells/well. The cells are allowed to adhere to plate overnight. The test compounds, vehicle control and positive controls are added 24 h after the cells are plated and allowed to incubate. Following 24 h of incubation, the media is aspirated, and the cells are washed with PBS. 40 mL of the media and 10 mL of 5 mg/mL of MTT solution prepared in PBS is added to the cells and incubated for 4 h at 37 ℃ and 5% CO2. After incubation, 150 mL of DMSO is added to each well and the cell viability is measured at 570 nM by an ELISA plate reader.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32717530/

Sellecks SP-96 Is geciteerd door 1 Publicatie

DELs enable the development of BRET probes for target engagement studies in cells [ Cell Chem Biol, 2023, 30(8):987-998.e24]	PubMed: 37490918

DELs enable the development of BRET probes for target engagement studies in cells [ Cell Chem Biol, 2023, 30(8):987-998.e24]

PubMed: 37490918

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.