SNS-314

In de HCT116 colorectale carcinoomcellijn, met intacte of uitgeputte p53-eiwitniveaus, toont SNS-314 Mesylate een verbeterde werkzaamheid bij sequentiële toediening met andere standaard chemotherapeutische middelen en de meest diepgaande synergieën worden geïdentificeerd voor middelen die het spindelassemblage-checkpoint activeren. [2] Een recente studie toont aan dat deze verbinding een krachtige antiproliferatieve activiteit vertoont in HCT116-cellen en de vorming van zachte agarkolonies remt. [3]

De sequentiële behandeling met SNS-314 Mesylate 24 uur later produceert een significante 72,5% tumorremming van HCT116 xenografts, terwijl deze verbinding als enkelvoudig agens geen significante remming van HCT116 tumorgroei produceert. [2] In het HCT116 menselijke darmkanker xenograftmodel resulteert de toediening van 50 en 100 mg/kg van deze chemische stof in een dosisafhankelijke remming van histon H3-fosforylering, wat duidt op een effectieve Aurora-B-remming in vivo. Bovendien vertonen HCT116 tumoren van dieren behandeld met dit middel krachtige en aanhoudende reacties, waaronder vermindering van gefosforyleerde histon H3-niveaus, verhoogd caspase-3 en het verschijnen van een vergrote kern. [3]

• Aurora-A Kinase Test

  Gehumaniseerde muizen Aurora A (aminozuren 107-403) wordt uitgedrukt in E. coli zoals eerder beschreven. Voor IC50-assays wordt deze verbinding drievoudig getitreerd in DMSO en 12,5-voudig verdund in assaybuffer (10 mM Tris HCl pH 7,2, 10 mM MgCl₂, 0,05% NaN₃, 0,01% Tween-20 en 0,1% BSA). Deze chemische stof wordt vervolgens 4-voudig verdund in assaybuffer die Aurora A en FAM-PKAtide bevat in uiteindelijke concentraties van respectievelijk 2 nM en 50 nM. De kinase-reactie wordt geïnitieerd door ATP toe te voegen aan de assaybuffer in een uiteindelijke concentratie van 10 mM en gedurende 25 minuten bij 21 °C geïncubeerd. Als positieve controle wordt DMSO toegevoegd in plaats van deze verbinding en als negatieve controle wordt assaybuffer toegevoegd in plaats van Aurora A. Beide controlereacties worden in drievoud uitgevoerd. Om gefosforyleerde PKAtide te detecteren, wordt de kinase-reactie gecombineerd met Progressive Binding Solution (1:400 Progressive Binding Reagent, 1 × Buffer A, Molecular Devices) in een verhouding van 1:3. Het mengsel wordt 30 minuten bij 21 °C geïncubeerd en de plaat wordt gescand op een Analyst AD met excitatie bij 485 nm en emissie bij 530 nm. Het percentage relatieve enzymatische activiteit wordt berekend door de mP-waarde voor elk putje te normaliseren naar de gemiddelde positieve controle. Relatieve enzymatische activiteitswaarden worden uitgezet als een functie van het logaritme van de verbindingconcentratie en IC50-waarden worden gegenereerd in GraphPad Prism-software met behulp van een sigmoïdale dosis-respons curve-fit. IC50

• Cellijnen

  HCT116 SCR and HCT116 p53 RNAi cells

• Concentraties

  ~125 nM

• Incubatietijd

  48 hours

• Methode

  Viability is measured using the CellTiter-Blue cell viability assay. Cells are treated as described above, although with a 5-day incubation period. Cytotoxicity is determined by measuring intracellular ATP using the CellTiter-Glo Luminescence Cell Viability Assay. Cells are seeded in white 96-well tissue culture plates at a density of 1.5-2 × 10³ cells/well, and a serial dilution of SNS-314 is dosed in combination with fixed concentrations for a total of 72 hours. Viability is determined as the ratio between the ATP in treated cells versus control cells. Apoptosis is measured using the caspase-Glo 3/7 system. Cells are plated in white 96-well plates as described above and treated first with this compound for 24 hours, washed with 200 μL of 1× PBS, and fresh medium is added with the second agent for 24 hours.

• Dierlijke modellen

  HCT116 cells are injected s.c. into the right flank of nu/nu mice.

• Doseringen

  ≤42.5 mg/kg

• Toediening

  Administered via i.p.