SB415286

SB 415286 remt GSK3α op een ATP-competitieve manier met een K_i van 31 nM en vertoont vergelijkbare potentie tegen GSK3β. Deze verbinding heeft weinig of geen activiteit tegen 24 andere proteïnekinasen met een IC50 > 10 μM. Het stimuleert glycogeensynthese in de Chang humane levercellijn met een EC50 van 2,9 μM, en induceert expressie van een β-catenine-LEF/TCF gereguleerd reportergen in HEK293-cellen. [1] Het beschermt zowel centrale als perifere zenuwstelselneuronen in kweek tegen celdood geïnduceerd door verminderde PI3-kinase pathway-activiteit op een concentratie-afhankelijke manier, wat gecorreleerd is met remming van GSK-3-activiteit en modulatie van GSK-3 substraten tau en β-catenine. [2] In L6-myotubes induceert deze chemische stof een veel grotere activering van GS (6,8-voudig) vergeleken met die veroorzaakt door insuline (4,2-voudig) of Li (4-voudig). [3] Deze verbinding (10 μM) remt rapamycine-geïnduceerde neerwaartse regulatie van cycline D1, en blokkeert rapamycine en -geïnduceerde apoptosis, wat een cruciale rol suggereert voor GSK3β in rapamycine-gemedieerde -sensitisatie. [4] Het voorkomt coxsackievirus-geïnduceerde celdood op een dosisafhankelijke manier via stabilisatie van β-catenine. [5] Deze chemische stof oefent een beschermend effect uit op waterstofperoxide-geïnduceerde celdood in B65 rat neuroblastoomcellen en neuronen, terwijl lithium de toxische effecten van waterstofperoxide niet vermindert. [7] De behandeling ervan versterkt TRAIL- en CH-11-geïnduceerde apoptosis in HepG2-cellen. [8] Remming van GSK-3 door deze verbinding veroorzaakt multiple myeloom (MM) celgroeistop en apoptosis door activering van de intrinsieke pathway. [9] Het vermindert de levensvatbaarheid van Neuro-2A-cellen en induceert de accumulatie van cellen in de G2/M-fase van de celcyclus en daaropvolgende apoptosis. [10]

Toediening van SB 415286 (~10 mg/kg tweemaal daags) vermindert de omvang en de mate van de door trinitrobenzeensulfonzuur (TNBS) veroorzaakte colonontsteking bij de rat, en vermindert de daling van het lichaamsgewicht, wat verband houdt met de downregulatie van NF-κB-activiteit, betrokken bij de generatie van pro-inflammatoire mediatoren. [6] Behandeling met deze verbinding met 1 mg/kg vertraagt de groei van Neuro-2A-cellen in vivo in naakte muizen significant. [10]

• GSK-3 activiteitsbepaling

  GSK-3 kinase activiteit wordt gemeten, in aanwezigheid van verschillende concentraties SB 415286, in een reactiemengsel met de volgende eindconcentraties: 1 nM humaan GSK3α of konijn GSK3α; 50 mM MOPS pH 7.0; 0.2 mM EDTA; 10 mM Mg-acetaat; 7.5 mM L-mercaptoethanol; 5% (w/v) glycerol; 0.01% (w/v) Tween-20; 10% (v/v) DMSO; 28 μM GS-2 peptide substraat. De GS-2 peptide sequentie komt overeen met een regio van glycogeen synthase die gefosforyleerd wordt door GSK-3. De test wordt geïnitieerd door de toevoeging van 0.34 μCi [³³P]γ-ATP (IC50 bepalingen) of 2.7 μCi [³³P]γ-ATP (Ki bepalingen). De totale ATP concentratie is 10 μM (IC50 bepalingen) of varieerde van 0 tot 45 μM (Ki bepalingen). Na 30 minuten incubatie bij kamertemperatuur wordt de test gestopt door de toevoeging van een derde testvolume van 2.5% (v/v) H₃PO₄ met 21 mM ATP. Monsters worden gespot op P30 fosfocellulosematten en deze worden zes keer gewassen in 0.5% (v/v) H₃PO₄. De filtermatten worden verzegeld in monstervoorraadzakken die Wallac betaplate scintillatievloeistof bevatten. De incorporatie van 33P in het substraatpeptide wordt bepaald door het tellen van de matten in een Wallac microbeta scintillatieteller.

• Cellijnen

  OPM-2, RPMI-8226, U-266, and INA-6

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~10 μM

• Incubatietijd

  48, or 72 hours

• Methode

  Cells are exposed to different concentrations of SB 415286 for 48 or 72 hours in 96-flat well plates. After 48 or 72 hours, [³H]thymidine is added to the cultures (10 μCi/well) for the last 12 hours. The [³H]thymidine incorporation is evaluated by scintillation counting by using a top count β-counter. Apoptosis is assessed by annexin V/Propidium Iodide staining or by detection of mitochondrial membrane potential. Cell death is evaluated by the analysis of Forward/Side scatter fluorescence changes. Fluorescence Activated Cell Sorting (FACS) analysis is performed using a FACS-Calibur Cell Cytometer.

• Dierlijke modellen

  Male Wistar rats with acute colitis provoked by trinitrobenzene sulphonic acid (TNBS)

• Doseringen

  ~1 mg/kg

• Toediening

  Administered subcutaneously twice daily