Ruxolitinib (INCB18424) Phosphate

INCB018424 remt potent en selectief JAK2V617F-gemedieerde signalering en proliferatie in Ba/F3-cellen en HEL-cellen. INCB018424 verhoogt de apoptose in Ba/F3-cellen dosisafhankelijk significant. INCB018424 (64 nM) resulteert in een verdubbeling van cellen met gedepolariseerde mitochondria in Ba/F3-cellen. INCB018424 remt de proliferatie van erytroïde progenitorcellen van normale donoren en polycythemia vera-patiënten met IC50 van respectievelijk 407 nM en 223 nM. INCB018424 toont een opmerkelijke potentie tegen erytroïde kolonieformatie met IC50 van 67 nM. [1]

INCB018424 (180 mg/kg, oraal, tweemaal daags) resulteert in een overlevingspercentage van meer dan 90% op dag 22 in een JAK2V617F-gedreven muismodel. INCB018424 (180 mg/kg, oraal, tweemaal daags) vermindert splenomegalie en circulerende niveaus van ontstekingscytokines aanzienlijk, en elimineert bij voorkeur neoplastische cellen, wat resulteert in een significant langere overleving zonder myelosuppressieve of immunosuppressieve effecten in een JAK2V617F-gedreven muismodel. [1] Het primaire eindpunt wordt bereikt bij 41,9% van de patiënten in de Ruxolitinib-groep in vergelijking met 0,7% in de placebogroep in de dubbelblinde studie naar myelofibrose. Ruxolitinib resulteert in het handhaven van een vermindering van het miltvolume en een verbetering van 50% of meer in de totale symptoomscore. [2] In totaal heeft 28% van de patiënten in de Ruxolitinib (15 mg tweemaal daags) groep ten minste een vermindering van 35% van het miltvolume in week 48 bij patiënten met myelofibrose, vergeleken met 0% in de groep die de best beschikbare therapie kreeg. De gemiddelde palpabele miltlengte is met 56% afgenomen met Ruxolitinib, maar met 4% toegenomen met de best beschikbare therapie in week 48. Patiënten in de ruxolitinib-groep vertoonden een verbetering van de algemene kwaliteits-van-leven-metingen en een vermindering van symptomen geassocieerd met myelofibrose. [3]

• Bindingstest

  Recombinante eiwitten worden tot expressie gebracht met behulp van Sf21-cellen en baculovirusvectoren en gezuiverd met affiniteitschromatografie. JAK-kinase assays gebruiken een homogene, tijd-opgeloste fluorescentie assay met het peptidesubstraat (-EQEDEPEGDYFEWLE). Elke enzymreactie wordt gedurende 1 uur uitgevoerd met Ruxolitinib of controle, JAK-enzym, 500 nM peptide, adenosinetrifosfaat (ATP; 1mM) en 2% dimethylsulfoxide (DMSO). De 50% remmende concentratie (IC50) wordt berekend als de INCB018424-concentratie die nodig is voor de remming van 50% van het fluorescerende signaal.

• Cellijnen

  Ba/F3 and HEL cells

• Concentraties

  3 μM

• Incubatietijd

  48 h

• Methode

  Cells are seeded at 2 × 10³/well of white bottom 96-well plates, treated with INCB018424 from DMSO stocks (0.2% final DMSO concentration), and incubated for 48 hours at 37 ℃ with 5% CO₂. Viability is measured by cellular ATP determination using the Cell-Titer Glo luciferase reagent or viable cell counting. Values are transformed to percent inhibition relative to vehicle control, and IC50 curves are fitted according to nonlinear regression analysis of the data using PRISM GraphPad.

• Dierlijke modellen

  JAK2V617F-driven mouse model

• Doseringen

  180 mg/kg

• Toediening

  o.g.