Pomalidomide (CC-4047)

Pomalidomide remt de door lipopolysaccharide (LPS) gestimuleerde TNF-alpha afgifte in humane PBMC's en in humaan volbloed met IC50 waarden van respectievelijk 13 nM en 25 nM. [1] Deze verbinding remt de groei van regulerende T-cellen die wordt gestimuleerd door IL-2 met een IC50 van ~1 μM. [2] Behandeling met deze chemische stof (6,4 nM-10 μM) verhoogt de productie van IL-2 in menselijke perifere bloed-T-cellen, en is iets krachtiger in de CD4+ subset dan in de CD8+ subset. Het is significant krachtiger dan CC-5013 in het verhogen van IL-2-, IL-5- en IL-10-niveaus, maar slechts iets krachtiger dan CC-5013 in het verhogen van IFN-γ-niveaus. Dit middel versterkt SEE en Raji cellen geïnduceerde AP-1 transcriptionele activiteit in Jurkat cellen op een dosisafhankelijke manier, met een maximale versterking van 4-voudig bij 1 μM. [3] Blootstelling van Raji cellen aan verschillende concentraties van deze verbinding (2,5-40 μg/mL) gedurende 48 uur leidt tot een significante afname van celproliferatie en DNA-synthese. Er is een vermindering van ~40% vergeleken met voertuigbehandelde controles. [4]

Pomalidomide versterkt het antitumorale effect van rituximab tegen B-cellymfomen bij ernstig gecombineerde immuundeficiënte muizen. Toediening van deze verbinding in combinatie met rituximab geeft de muizen een mediane overlevingsperiode van 74 dagen vergeleken met 58 dagen van CC5013/rituximab behandeling en 45 dagen van rituximab monotherapie. Het synergetische effect van deze verbinding en rituximab kan volledig worden opgeheven door uitputting van NK-cellen, wat de suggestie ondersteunt dat NK-celuitbreiding een mechanisme is waarmee deze verbinding de antitumorale activiteit van rituximab kan versterken. [4]

• Remming van TNF-α synthese

  TNF-α-remmende activiteit wordt gemeten in met lipopolysacharide (LPS) gestimuleerde PBMC's. Pomalidomide wordt 1 uur voorafgaand aan de toevoeging van LPS (1 μg/mL) aan humane PBMC's toegevoegd en de incubatie wordt nog 18-20 uur voortgezet. Supernatanten worden vervolgens geoogst en de concentratie van TNF-α in de supernatanten wordt bepaald met ELISA. De concentratie van deze verbinding die de TNF-productie met 50% remt (IC50) wordt berekend door middel van niet-lineaire regressieanalyse. De humane volbloed TNF-remmingstest wordt op een vergelijkbare manier uitgevoerd als de PBMC-test, behalve dat gehumaniseerd vers humaan volbloed direct in microtiterplaten wordt uitgeplaat.

• Cellijnen

  Raji, SU-DHL-4 and SU-DHL-10 cell lines

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations 2.5-40 μg/mL

• Incubatietijd

  24 or 48 hours

• Methode

  For assessment of cell apoptosis, Lymphoma cell lines are exposed to Pomalidomide (5 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. The cells are stained with FITC-labeled Annexin V and propidium iodine. Cell apoptosis is analyzed by multicolor flow cytometric analysis using a fluorescence-activated cell sorter/FACStar Plus flow cytometer. Cells are scored as apoptotic if they are Annexin V–positive and propidium iodine–negative/positive (early and late apoptosis, respectively). For determination of cell proliferation, the Lymphoma cell lines are exposed to this compound (2.5, 5, 10, 20, and 40 μg/mL) for 24 hours or 48 hours. 1 μCi per well (96-well plate) of [³H]-thymidine is added and cells are incubated for another 18 hours. Cells are then harvested using the Harvest system into the 96-well glass filters and [³H]-thymidine uptake is measured using an automated scintillation counter.

• Dierlijke modellen

  Disseminated lymphoma-bearing SCID mice

• Doseringen

  0.5 mg/kg

• Toediening

  Injection i.p.