PF-477736

PF-477736 (128 nM) heft de camptothecine-geïnduceerde DNA-schadecheckpoints op een dosisafhankelijke manier op in CA46- en HeLa-cellen. Deze verbinding heft effectief de -geïnduceerde S-fase-arrest op met een overeenkomstige toename in apoptotische celpopulaties in HT29-cellen. Deze chemische stof (540 nM) versterkt de -geïnduceerde cytotoxiciteit op een tijd- en dosisafhankelijke manier in HT29-cellen. Het versterkt de groeiremmende activiteit van een panel van chemotherapeutische middelen over een breed spectrum van p53-deficiënte menselijke kankercellijnen in de MTT-assay. Toevoeging van deze verbinding (360 nM) aan -gearresteerde cellen induceert een dramatische toename in de intensiteit van H2AX-fosforylering, wat een groter aantal γ-H2AX-moleculen nabij DNA-schadeplekken weerspiegelt. [1] Deze chemische stof (0,5 nM) blokkeert selectief p73- en P53-fosforylering in aanwezigheid van curcumine in HL-60-cellen. [2] Het (360 nM) onderdrukt -geïnduceerde fosforylering van histone H3 (Ser10) en Cdc25C (Ser216) en versterkt apoptose in COLO205-cellen. [3] Deze verbinding (250 nM) gecombineerd met MK-1775 heeft een duidelijke synergistische cytotoxische activiteit in OVCAR-5-cellen. Het (250 nM) gecombineerd met MK-1775 veroorzaakt accumulatie van cellen met een DNA-gehalte tussen 2N en 4N in OVCAR-5-cellen. Deze chemische stof (250 nM) gecombineerd met MK-1775 veroorzaakt vroegtijdige mitose vóór het einde van de DNA-replicatie, met beschadigd DNA dat leidt tot apoptotische celdood in OVCAR-5-cellen. [4]

PF-477736 (4 mg/kg i.v.) resulteert in een terminale halfwaardetijd (T1/2) van 2,9 uur, een AUC van 5,72 μg×hr/mL en een CLp van 11,8 mL/min/kg bij ratten. Deze verbinding versterkt dosisafhankelijk de antitumoractiviteit van een maximaal getolereerde dosis in het Colo205 xenograft muismodel. Deze chemische stof (12 mg/kg) induceert een toename in de fosforylering van histone H3 (Ser10) en van fosfo-histone H2AX in het Colo205 xenograft muismodel. [1] Deze verbinding (15 mg/kg i.p.) versterkt de geïnduceerde tumorgroeiremming en tumorgroeivertraging in COLO205- en MDA-MB-231 xenograftmodellen. [3] Deze chemische stof (10 mg/kg eenmaal daags i.p.) gecombineerd met MK-1775 (30 mg/kg tweemaal daags oraal) leidt tot een grotere tumorgroeiremming bij muizen met OVCAR-5 xenografts. [4]

• Bindingstest

  De assay wordt uitgevoerd in een 96-wells plaat gedurende 20 minuten bij 30℃ in 0,1 mL assaybuffer met 50 mM TRIS pH 7,5, 0,4 M NaCl, 4 mM PEP, 0,15 mM NADH, 28 eenheden lactaatdehydrogenase/mL, 16 eenheden pyruvaatkinase/mL, 3 mM DTT, 0,125 mM Syntide-2, 0,15 mM ATP en 25 mM magnesiumchloride. Assays worden geïnitieerd met 1 nM CHK1 kinase domein. De remming van CHK1 activiteit wordt bepaald door initiële snelheden te meten in aanwezigheid van variërende concentraties van deze verbinding. De gegevens worden geanalyseerd met Enzyme Kinetic en Excel software en aangepast aan een kinetisch model voor competitieve remming om een Ki-waarde te verkrijgen. De kinase-selectiviteit van deze chemische stof wordt geëvalueerd door screening bij 1 μM of 10 μM tegen een panel van ongeveer 100 proteïnekinasen.

• Cellijnen

  HT29, Colo205, PC-3, MDA-MB-231 and K562 cells

• Concentraties

  ~1 μM

• Incubatietijd

  96 hours

• Methode

  The IC50 assay measures the antiproliferative effects of PF-477736 on p53-defective human cancer cell lines. Cells in each line are seeded in complete medium at an exponentially growing density in 96-well assay plate and allowed to attach for 16 hours. Serial dilutions of this compound are then done, and appropriate controls are added to each plate. Cells are incubated with drug for 96 hours. After incubation, MTT working stock diluted in complete medium is added to each well, and cells are incubated for 4 hours. After centrifugation and supernatant removal, DMSO is added to each well and plates are read on SpectraMax plate reader at 540 nm.

• Dierlijke modellen

  Colo205 xenograft mouse model

• Doseringen

  40 mg/kg

• Toediening

  intravenous injection