PCI-34051

PCI-34051 bezit een veelbelovende potentie voor HDAC8 met een K_i van 10 nM. Deze verbinding heeft een hoge selectiviteit (ongeveer vijfvoudig) voor HDAC8 ten opzichte van de andere klasse I HDAC's, waaronder HDAC1. Het vertoont een meer dan 200-voudige selectiviteit ten opzichte van HDAC1 en HDAC6, en een meer dan 1000-voudige selectiviteit ten opzichte van HDAC2, HDAC3 en HDAC10. Deze chemische stof remt de ovariële tumorlijn OVCAR-3 met een GI50 van 6 μM en 15% celdood. Noch significante tubuline- noch histonacetylering wordt waargenomen in de gevoelige cellijnen behandeld met deze verbinding bij concentraties lager dan 25 μM na 24 uur, noch op eerdere tijdstippen. Het induceert een selectief cytotoxisch effect in cellijnen die alleen zijn afgeleid van T-celmaligniteiten. Deze verbinding induceert caspasedependente apoptose. Wanneer caspase-3-activiteit op verschillende tijdstippen na behandeling met 5 μM van deze chemische stof wordt gemeten, worden toenemende activiteitsniveaus waargenomen van 12 tot 24 tot 48 uur, een ander kenmerk van apoptose, consistent met de hogere niveaus van caspase-activiteit op dit tijdstip. Het stimuleert geen Bid-splitsing, een karakteristiek effect van de extrinsieke apoptotische route. Terwijl P116 en J.RT3-T.5 gevoelig zijn voor deze verbinding, vertoont de PLCγ1-deficiënte J.gamma1-lijn een duidelijke afname van de omvang van de geïnduceerde apoptose. Bovendien beïnvloeden calciumspiegels in evenwichtstoestand de door deze chemische stof geïnduceerde apoptose sterk. Het induceert cytochroom c-afgifte uit mitochondriën.[1]

PCI-34051 is een potente en specifieke HDAC8 remmer.

• Histondeacetylase-activiteit

  Voor de karakterisering van PCI-34051 worden metingen uitgevoerd in een reactievolume van 100 μL met behulp van 96-well assayplaten in een fluorescentieplaatlezer. Voor elk isozym. Het HDAC-eiwit in reactiebuffer (50 mM HEPES, 100 mM KCl, 0,001% Tween-20, 5% dimethylsulfoxide, pH 7,4, aangevuld met runder serumalbumine in concentraties van 0-0,05%) wordt gemengd met deze verbinding in verschillende concentraties en gedurende 15 minuten geïncubeerd. Trysine wordt toegevoegd tot een eindconcentratie van 50 nM, en acetyl-gly-Ala-(N-acetyl-Lys)-amino-4-methylcoumarine wordt toegevoegd tot een eindconcentratie van 25-100 μM om de reactie te initiëren. Na een latentietijd van 30 minuten wordt de fluorescentie gedurende 30 minuten gemeten met behulp van een excitatiegolflengte van 335 nm en een detectiegolflengte van 460 nm. De toename van de fluorescentie in de tijd wordt gebruikt als maat voor de reactiesnelheid.

• Cellijnen

  A549 cell line, Ovcar-3 cell line

• Concentraties

  5 μM

• Incubatietijd

  24 hours

• Methode

  Tumor cell lines and human umbilical vein endothelial cells are cultured for at least two doubling times, and growth is monitored at the end of PCI-34051 exposure using an Alamar Blue fluorometric cell proliferation assay as recommended by the manufacturer. This compound is assayed in triplicate wells in 96-well plates. The concentration required to inhibit cell growth by 50% (GI50) and 95% confidence intervals are estimated from nonlinear regression using a four-parameter logistic equation.

• Dierlijke modellen

  Male C57BL/6 and BALB/c mice

• Doseringen

  40 mg/kg

• Toediening

  i.p.