PACAP 1-38

PACAP 1-38 heeft krachtige, effectieve en langdurige stimulerende effecten op de sympathische neuronale NPY- en catecholamineproductie[1]. Het is een pleiotroop neuropeptide, dat een verscheidenheid aan biologische acties vertoont, waaronder activiteiten als neurotransmitter, neuromodulator, neurotrofe factor, evenals een immunomodulator, in immuuncellen door zijn effect op MAPK-signalering en modulatie van activering van NFκB. Deze verbinding voorkomt dramatisch letsel van gekweekte renale proximale tubuluscellen veroorzaakt door myeloomlichte ketens door onderdrukking van pro-inflammatoire cytokineproductie, door p38 MAPK en translocatie van NFκB te remmen via zowel PAC1- als VPAC1-receptoren. Het remt de groei van myeloomcellen direct en mogelijk ook indirect door de productie van de groeifactor, IL-6, uit beenmergstromacellen te onderdrukken, die wordt gestimuleerd door adhesie van myeloomcellen. Dit neuropeptide onderdrukte de afgifte van zowel IL-6 als TNFα dosisafhankelijk[2].

PACAP38 is in staat om lichtketen-geïnduceerde cytokine-expressie met grote potentie te remmen en voorkwam de resulterende celbeschadiging in vivo. Dit compound wordt echter ook beschouwd als een autoregulerende factor voor bepaalde tumoren, die hun groei op een autocriene manier stimuleert[2].

• Cellijnen

  human renal proximal tubule cell line

• Concentraties

  0.0001-100 nM

• Incubatietijd

  3 days

• Methode

  Human renal proximal tubule cells plated onto 6-well tissue culture plates are grown at 37°C in DRM-23E medium supplemented with 0.5% (vol/vol) FBS in an incubator for 24 hours. After prewashing with serum-free medium, the cells are incubated with κ-LC (1.5 mg/ml, ∼ 50 μM) for 3 days in the presence and absence of various concentrations of PACAP38 as well as kinase and transcription factor inhibitors. Cell viability is determined by trypan blue exclusion assays; in all experiments, at least 85% of cells remain viable. After exposure to test substances, culture supernatants are harvested and stored at –70°C for cytokine assays. After the medium is removed, the cells are washed with ice-cold PBS, and proteins are extracted by lysing cells with Sigma Mammalian Cell Lysis Reagents. Lysates are scraped and passed through a 21-gauge needle to shear DNA, and centrifuged at 12 000g for 10 minutes at 4°C. Finally, supernatants are harvested and used for kinase studies.

• Dierlijke modellen

  Male Sprague-Dawley rats

• Doseringen

  2 nmol/10 mL

• Toediening

  i.v.