BGT226 (NVP-BGT226) maleate

De antiproliferatieve en pro-apoptotische effecten van NVP-BGT226 zijn onafhankelijk van de bcr-abl-status. De activering van de AKT/mTOR-signaalcascade wordt onderdrukt door NVP-BGT226 op een concentratie- en tijdsafhankelijke manier. Flowcytometrische analyse toont een accumulatie van cellen in de G(0)-G(1)-fase met gelijktijdig verlies in de S-fase. NVP-BGT226 vertoont een krachtige groeiremmende activiteit tegen alle geteste cellijnen, inclusief de SCC4-, TU183- en KB-cellijnen, met een IC50 variërend van 7,4 tot 30,1 nM. Opmerkelijk is dat zowel Detroit 562- als HONE-1-cellen, die de PIK3CA-mutatie H1047R tot expressie brengen, nog steeds gevoelig zijn voor het groeiremmende effect van NVP-BGT226-behandeling. Bovendien de gevoeligheid voor NVP-BGT226 tussen HONE-1-cellen. Resultaten van de terminale deoxynucleotidyl transferase-gemedieerde dUTP nick end labeling (TUNEL) test en de analyse van caspase 3/7 en PARP geven aan dat NVP-BGT226 de dood van kankercellen induceert via een apoptose-onafhankelijk pad. NVP-BGT226 induceert autofagie, zoals aangegeven door de aggregatie en opregulatie van het microtubulus-geassocieerde eiwit light chain 3B-II, en p62-afbraak. Gense silencing van Beclin1 of co-behandeling met de autofagosoomremmer, 3-methyladenine, remt de NVP-BGT226-geïnduceerde autofagie en leidt tot het herstel van kolonieoverleving.[2] NVP-BGT226 remt de groei in veelvoorkomende myeloomcellijnen en primaire myeloomcellen (zoals NCI-H929, U266, RPMI-8226 en OPM2 MM-cellijnen) bij nanomolaire concentraties op een tijdsafhankelijke en dosisafhankelijke manier. NVP-BGT226 remt de fosforylering van proteïnekinase B (Akt), P70S6k en 4E-BP-1 op een tijdsafhankelijke en dosisafhankelijke manier. Het stimulerende effect van insuline-achtige groeifactor 1, interleukine-6 en geconditioneerd medium van HS-5 stromacellen op de groei van myeloomcellen wordt volledig opgeheven door NVP-BGT226. Remming van fosfo-inositol-3-kinase/mammalian target of rapamycin door NVP-BGT226 is zeer effectief, en NVP-BGT226 vertegenwoordigt een potentiële nieuwe kandidaat voor gerichte therapie bij multipel myeloom. Gecombineerde remming van PI3K en mammalian target of rapamycin (mTOR) door NVP-BGT226 is bewezen zeer effectief te zijn wat betreft de inductie van apoptose en remming van proliferatie. [3] In een andere studie arresteren na 24 uur 86,9% van de met 100 nM NVP-BGT226 behandelde MiaPaCa-2 cellen in de G0/G1-fase vergeleken met 55,6% van de controlecellen. [4]

In een xenograft diermodel vertraagt NVP-BGT226 de tumorgroei significant op een dosisafhankelijke manier, samen met onderdrukte cytoplasmatische expressie van p-p70 S6 kinase en de aanwezigheid van autofagosoomvorming. NVP-BGT226 remt tumorgroei op een dosisafhankelijke manier in een FaDu cel xenograft muismodel. Orale toediening van NVP-BGT226 in 2,5 en 5 mg/kg gedurende 3 weken veroorzaakt respectievelijk 34,7% en 76,1% vermindering van de tumorgroei op dag 21 (vergeleken met de controle). NVP-BGT226 vertoont een vergelijkbare remming tegen tumorgroei als rapamycine. Het eindvolume van beide groepen is significant kleiner dan die behandeld met LY294002 (een PI3K-remmer) of de controle. [2]

• Cellijnen

  NCI-H929, U266, RPMI-8226 and OPM2 MM cells

• Concentraties

  20-250 nM

• Incubatietijd

  36 hours

• Methode

  NCI-H929, U266, RPMI-8226 and OPM2 MM cells are seeded in 96-well plates at a concentration of 1.5 × 10⁴ cells/well in RPMI medium supplemented with 10% fetal bovine serum with or without NVP-BGT226 that is to be tested. After 36 hours, BrdU-labelling solution is added (final concentration: 10 μM), and cells are cultured for another 12 hours in a humidified atmosphere (37 °C/5% CO₂). Then, the plates are centrifuged (10 min, 300 g), and the supernatants are discarded. The plates are dried at 60 °C for 2 hours. After fixation with ethanol/HCl for 30 min at -20 °C, the DNA is partially digested by nuclease treatment for 30 min at 37 °C. The cells are washed three times with medium and incubated with anti-BrdU-POD labelling solution for 30 min at 37 °C. The anti-POD solution is removed and the cells are washed three times with washing buffer. The ABTS substrate solution is added, and absorbance is measured in a microplate reader at 405 nm with a reference wave length of 490 nm.

• Dierlijke modellen

  Human FaDu xenografted mice

• Doseringen

  5 mg/kg for 3 weeks

• Toediening

  Oral administration