NSC 23766 Trihydrochloride

NSC23766 blijkt te passen in een oppervlaktegroef van Rac1 die bekend staat als cruciaal voor GEF-specificatie. NSC23766 remt effectief de Rac1-binding en -activering door de Rac-specifieke GEF Trio of Tiam1 op een dosisafhankelijke manier zonder interferentie met de nauw verwante Cdc42- of RhoA-binding of -activering door hun respectievelijke GEF's, of met Rac1-interactie met BcrGAP of effector PAK1. [1]

NSC 23766 is actief in het reguleren van Rac GTPase-functies op het cytoskelet en vele celfuncties, waaronder Cell Cycle, celgroei, adhesie, migratie en gentranscriptie. NSC 23766 (50 μM) blokkeert krachtig serum- of bloedplaatjes-afgeleide groeifactor-geïnduceerde Rac1-activering en lamellipodia-vorming zonder de activiteit van endogene Cdc42 of RhoA in NIH 3T3-cellen te beïnvloeden. NSC 23766 vermindert de Trio- of Tiam1-, maar niet Vav-, Lbc-, Intersectin- of constitutief actieve Rac1-mutant-gestimuleerde NIH 3T3-celgroei en onderdrukt Trio-, Tiam1- of Ras-geïnduceerde celtransformatie. NSC23766 remt dosisafhankelijk PC-3-celproliferatie en anker-onafhankelijke groei. 25 μM NSC23766 remt de PC-3-celinvasie door Matrigel met 85%. [1] 50 μM NSC 23766 remt trombine-geïnduceerde activering van Rac1 en Rac2 in humane bloedplaatjes, evenals bloedplaatjesaggregatie. [2]

NSC23766 voorkomt Aβ40- en Aβ42-productie in swAPP-HEK293-cellen zonder Notch en sAPPα te beïnvloeden. NSC23766 voorkomt γ-secretase-activiteit in cellen, maar fungeert niet als een directe γ-secretase-remmer. NSC23766 vermindert dosisafhankelijk de niveaus van gesecreteerde en intracellulaire Aβ40 met een IC50 van 48,94 μM. 50 μM NSC 23766 remt de afgifte van Aβ42 met 57,97%. [3]

NSC23766 reguleert de expressie van endotheel stikstofmonoxide synthase en de endotheelfunctie. 100 μM NSC23766 onderdrukt de eNOS-promotoractiviteit met 60% in bovine aortale EC's en met 30% tot 35% in bEND.3-cellen. Remming van Rac1 met NSC23766 destabiliseert eNOS-mRNA en verkort de halfwaardetijd tot 17 uur. NSC23766 verzwakt dosisafhankelijk de ACh-geïnduceerde relaxatie van aorta-ringen van wildtype muizen. [4]

NSC23766 remt celgroei en induceert apoptose. NSC23766 vermindert de levensvatbaarheid van MDA-MB-468- en MDA-MB-231-cellen op een dosisafhankelijke manier met een IC50 van ~10 μM, wat niet gecorreleerd is met de status van oestrogeenreceptor (ER), progesteronreceptor (PR), Her2 en p53-mutatie. NSC23766 heeft weinig effect op de overleving van de normale mammaire epitheelcellen MCF12A. Na 24 uur blootstelling aan NSC 23766 vertoonden MDA-MB-231-cellen een toename van 41% naar 65% in de G1-fase en een gelijktijdige afname in de S- en G2-M-fasen. 100 μM NSC23766 induceert een zesvoudige toename van apoptotische MDA-MB-468. De remming van NSC23766 op Cell Cycle-arrest of apoptose in borstkankercellen wordt gemedieerd door downregulatie van cycline D1, survivine en X-gebonden remmer van proteïne-apoptose. [5]

NSC23766 induceert mobilisatie van hematopoëtische stamcellen/voorlopercellen. Intraperitoneale toediening van NSC23766 (2,5 mg/kg) aan de ''slecht mobiliserende'' C57Bl/6 muizenstam leidt tot een tweevoudige toename van circulerende hematopoëtische stamcellen/voorlopercellen 6 uur na injectie. [2]

NSC23766 verlicht lipopolysaccharide-geïnduceerde acute longschade bij muizen. Behandeling met NSC23766 bij 1 of 3mg/kg vermindert niet alleen de infiltratie van ontstekingscellen en MPO-activiteiten, maar remt ook de mRNA-expressie van pro-inflammatoire mediatoren, tumornecrosefactor-α en interleukine-1β. NSC23766 vermindert ook de accumulatie van Evans Blue en albumine in LPS-uitgedaagde longen. [6]

• Rho GTPase-activiteitstest

  Cellen worden gekweekt in de logaritmische fase in een 10 cm schaal, en worden gedurende 24 uur in 0,5% serummedium of anderszins aangegeven uitgehongerd vóór lysis in een buffer die 20 mM Tris HCl (pH 7,6), 100 mM NaCl, 10 mM MgCl₂, 1% Nonidet P-40, 10% glycerol en 1× protease-remmermengsel bevat. Lysaten worden geklaard, de eiwitconcentraties worden genormaliseerd en het GTP-gebonden Rac1 in de lysaten wordt gemeten met een effector domein pull-down assay. Voor de His6-PAK1 PBD pull-down assay worden cellysaten 30 min geïncubeerd met Ni2+-agarose-geïmmobiliseerd His6-PAK1 PBD-domein (~1 μg elk) gezuiverd uit E. coli. De Ni2+-agarose co-precipitaten worden tweemaal gewassen in de wasbuffer en geanalyseerd door immunoblotting met anti-Rac1 monoklonaal antilichaam.

• Cellijnen

  Human breast cancer cells MDA-MB-468

• Concentraties

  0-100 μM

• Incubatietijd

  2 days

• Methode

  Cells (1.5 × 10⁴/mL) are seeded in each well of 96-well tissue culture plates with 200 μL of medium. After 24 hours of plating, the medium is replaced with 200 μL of fresh medium containing NSC23766 at the indicated concentrations. At the end of the treatment period 20 μL of MTS solution are added to each well and incubated at 37 ℃ for 2 hours. Absorbance at 490 nm is read on a 96-well plate reader.

• Dierlijke modellen

  Male ICR mic

• Doseringen

  1 or 3 mg/kg

• Toediening

  i.p.