Mocetinostat (MGCD0103)

Mocetinostat (MGCD0103) remt slechts een subset van de negen menselijke recombinante HDAC's, waaronder HDAC1, HDAC2, HDAC3 en HDAC11 bij nanomolaire of lage micromolaire concentraties, op een dosisafhankelijke manier. Het vertoont de meest potente remmende activiteit tegen menselijke HDAC1- en HDAC2-enzymen in vitro, en remt geen klasse II HDAC's. De exocyclische aminogroep in deze verbinding is noodzakelijk voor de enzymremmende activiteit, omdat de HDAC-remmende activiteit tegen HDAC1 en HDAC2 volledig wordt opgeheven met het desamino-analoog. De remmende activiteit bereikt het maximale plateau bij 6 μM, en de maximaal rembare enzympool die wordt beïnvloed door MGCD0103 is 75% van de totale enzymactiviteit in HCT116-cellen, terwijl NVP-LAQ824 bijna 100% daarvan in deze cellen remt. In A549-cellen vertoont het ook een dosisafhankelijke remming van de HDAC-activiteit in hele cellen. [1]

Mocetinostat (MGCD0103) remt significant de groei van humane tumorxenografts bij naakte muizen en de antitumoractiviteit correleerde met inductie van histonacetylering in tumoren. P.O. toediening van deze verbinding (2HBr zout) vermindert significant de groei van geïmplanteerde geavanceerde A549 tumoren bij naakte muizen op een dosisafhankelijke manier na 13 dagen dagelijkse toediening. Het (170 mg/kg voor 2HBr zout, overeenkomend met 120 mg/kg vrije base) blokkeert significant de groei van tumoren vergeleken met alleen voertuigbehandeling zonder verandering in lichaamsgewicht. Bovendien vermindert het het aantal witte bloedcellen niet en wordt het goed verdragen. De verbinding is ook oraal actief in vele andere humane tumorxenograftmodellen, waaronder NSCLC H1437. Bij 80 mg/kg (vrije base) blokkeert het bijna volledig de groei van H1437 tumoren na 13 dagen dagelijkse p.o. toediening zonder vermindering van lichaamsgewicht bij dieren. [1] Het verlaagt de pulmonale arteriële druk dramatischer. Bovendien verbetert deze verbinding de pulmonale arteriële acceleratietijd en vermindert het de systolische inkeping van de pulmonale arteriële stroomomhulsel, wat een positieve impact van de HDAC-remmer suggereert op de pulmonale vasculaire remodellering en verstijving. [2]

• HDAC-enzymtest in vitro

  De deacetylase-enzymtest is gebaseerd op een homogene fluorescentie-vrijgavetest. Gezuiverde recombinante HDAC-enzymen worden geïncubeerd met Mocetinostat (MGCD0103) verdund in verschillende concentraties gedurende 10 minuten in assaybuffer [25 mM HEPES (pH 8.0), 137 mM NaCl, 1 mM MgCl₂, 2.7 mM KCl] bij kamertemperatuur. Het substraat Boc-Lys(ε-Ac)-AMC wordt aan de reactie toegevoegd voor verdere incubatie bij 37 °C. De concentratie van het substraat en de incubatietijd variëren voor verschillende isotypen van HDAC-enzymen. Een incubatie van 20 minuten met trypsine bij kamertemperatuur zorgt voor de afgifte van het fluorofoor uit het gedeacetyleerde substraat. Het fluorescerende signaal wordt gedetecteerd door een fluorometer bij een excitatie van 360 nm, een emissie van 470 nm en een afsnijding bij 435 nm.

• Cellijnen

  Human mammary epithelial cells (HMEC), human foreskin fibroblasts (MRHF) cells

• Concentraties

  0-60 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Human mammary epithelial cells (HMEC) and human foreskin fibroblasts (MRHF) cells in 96-well plates are incubated with Mocetinostat (MGCD0103) at various concentrations for 72 hours at 37 °C in 5% CO₂. MTT is added at a final concentration of 0.5 mg/ml and incubated with the cells for 4 hours before an equal volume of solubilization buffer is added. After overnight incubation, solubilized dye is quantified by reading at 570 nm using a reference at 630 nm. Absorbance values are converted to cell numbers according to a standard growth curve of the relevant cell line. The concentration which reduces cell numbers to 50% relative to DMSO-treated cells is determined as MTT IC5

• Dierlijke modellen

  Female CD-1 nude mice bearing H1437 tumors

• Doseringen

  80 mg/kg

• Toediening

  Administered via p.o.