MG132

MG-132 vertoont >1000 keer meer activiteit dan ZLLal in het remmen van de ZLLL-MCA-afbrekende activiteit van 20S proteasome met een IC50 van 100 nM versus 110 μM. Deze verbinding remt ook calpaïne met een IC50 van 1,2 μM. Deze chemische stof induceert neurietuitgroei in PC12-cellen bij een optimale concentratie van 20 nM, wat 500 keer meer potentie toont dan ZLLal. [1] Deze verbinding (10 μM) remt krachtig TNF-α-geïnduceerde NF-κB-activering, interleukine-8 (IL-8) gen transcriptie en IL-8 eiwitafgifte in A549-cellen door remming van proteasome-gemedieerde IκBα-degradatie. [2] Deze chemische behandeling induceert krachtig p53-afhankelijke apoptose in KIM-2-cellen door 26S proteasome remming. [3] In tegenstelling tot BzLLLCOCHO of PS-341, resulteert deze verbindingbehandeling in een zwakke remming van de chymotrypsine-achtige (CT-L) en peptidylglutamyl peptide hydrolyserende (PGPH) activiteiten van het 26S proteasome, terwijl multipel myeloomcellen (U266 en OPM-2) gevoeliger zijn voor inductie van apoptose door deze chemische stof dan BzLLLCOCHO. [4] Deze verbinding (1 μM) sensibiliseert TRAIL-resistente prostaatkankercellen door activering van de AP-1-familieleden c-Fos en c-Jun, die op hun beurt het antiapoptotische molecuul c-FLIP(L) onderdrukken. [5] Deze chemische stof verbetert significant het vermogen van inositolhexakisfosfaat (IP6) om de cellulaire metabolische activiteit te verminderen in zowel PC3 als DU145 androgeen-onafhankelijke prostaatkanker (AIPCa) cellijnen. [6]

Toediening van MG-132 herstelt effectief de expressieniveaus en plasmamembraanlokalisatie van dystrofine, β-dystroglycaan, α-bdystroglycaan en α-sarcoglycaan in skeletspiervezels van mdx-muizen, vermindert spierbeschadiging en verbetert de histopathologische tekenen van spierdystrofie. [7] Behandeling met deze verbinding vermindert significant immobilisatie-geïnduceerde atrofie van de skeletspieren bij muizen, door het neerwaarts reguleren van de spierspecifieke ubiquitine ligasen atrogin-1/MAFbx en MuRF-1 mRNA. [8]

• Meting van remmende activiteiten van MG-132 tegen 20S proteasome

  Het reactiemengsel voor de 20S proteasome remmende assay bevat 0,1 M Tris-acetaat, pH 7,0, 20S proteasome, MG-132 en 25 μM substraat opgelost in dimethylsulfoxide in een eindvolume van 1 mL. Na incubatie bij 37 °C gedurende 15 minuten wordt de reactie gestopt door toevoeging van 0,1 mL 10% SDS en 0,9 mL 0,1M Tris-acetaat, pH 9,0. De fluorescentie van de reactieproducten wordt gemeten. Om de IC50 tegen 20S proteasome te bepalen, worden verschillende concentraties van deze verbinding in het assaymengsel opgenomen.

• Cellijnen

  KIM-2, HC11, and ES

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~25 μM

• Incubatietijd

  24 and 48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of MG-132 for 24, and 48 hours. Supernatant and monolayer cells are harvested by centrifugation and fixed in 70% ethanol in PBS for staining with acridine orange. Equal volumes of cells and acridine orange (5 mg/mL in PBS) are mixed on a microscope slide and examined by fluorescence microscopy. For annexin V analysis, cells are harvested by centrifugation and stained with annexin V and propidium iodide. For cell cycle analysis, cells are rehydrated in PBS at room temperature for 10 minutes, followed by staining with propidium iodide (5 mg/mL). All samples are analyzed using a Coulter Epics XL flow cytometer.

• Dierlijke modellen

  Male mdx (C57BL/10ScSn DMD mdx) mice

• Doseringen

  ~10 μg/kg/day

• Toediening

  Injection