Maraviroc (UK-427857)

Maraviroc remt de MIP-1β-gestimuleerde γ-S-GTP-binding aan HEK-293 celmembranen, wat duidt op het vermogen om de chemokine-afhankelijke stimulatie van GDP-GTP-uitwisseling bij het CCR5/G-eiwitcomplex te remmen. Deze verbinding remt ook de stroomafwaartse gebeurtenis van chemokine-geïnduceerde intracellulaire calciumherverdeling, met IC50's variërend van 7 tot 30 nM verkregen tegen MIP-1β, MIP-1α en RANTES. In dezelfde experimenten triggert het geen afgifte van intracellulair calcium bij concentraties tot 10 μM, wat aangeeft dat het geen CCR5-agonistactiviteit heeft. In overeenstemming hiermee slaagt deze chemische stof er niet in om CCR5-internalisatie te induceren. Het is actief bij lage nanomolaire concentraties tegen HIV-1 Ba-L. Deze verbinding remt alle 200 pseudotype virussen met een geometrisch gemiddelde IC90 van 13,7 nM. [1] Bij concentraties >1000 keer de 50% remmende concentratie remde het andere chemokinereceptoren (CCR1, 2, 3, 4, 7 en 8; CXCR1 en 2) niet in een klinisch relevante mate[3].

De halfwaardetijden van Maraviroc zijn 0,9 uur bij de rat en 2,3 uur bij de hond. Na orale toediening (2 mg/kg) aan de hond trad de Cmax (256 ng/ml) 1,5 uur na toediening op, en de biologische beschikbaarheid is 40%. Bij de rat wordt ongeveer 30% van de toegediende dosis geabsorbeerd uit het darmkanaal. [1] Vrouwelijke RAG-hu-muizen worden vaginaal uitgedaagd met HIV-1 een uur na intravaginale toepassing van de compoundgel. Deze met gel behandelde muizen waren volledig beschermd tegen vaginale HIV-1-uitdaging, in tegenstelling tot met placebogel behandelde muizen die allemaal geïnfecteerd raakten. Vaginale toediening van deze verbinding beschermt muizen volledig tegen vaginale HIV-1-uitdaging. Hoewel er een duidelijk patroon is van CD4 T-celafname bij met placebogel behandelde en viraal uitgedaagde muizen, zijn hun niveaus stabiel bij muizen die deze chemische gel krijgen. [2]

• Remming van chemokinebinding aan CCR5

  Binding van ¹²⁵I-gelabeld MIP-1α, MIP-1β en RANTES aan CCR5 wordt gemeten met behulp van intacte HEK-293-cellen die de receptor stabiel tot expressie brengen of membraanpreparaten daarvan. Kortom, cellen worden geresuspendeerd in bindingsbuffer (50 mM HEPES met 1 mM CaCl₂, 5 mM MgCl₂ en 0,5% bovine serumalbumine [BSA] en aangepast tot pH 7,4) tot een dichtheid van 2 × 10⁶ cellen/ml. Voor membraanpreparaten worden met fosfaatgebufferde zoutoplossing (PBS) gewassen cellen geresuspendeerd in lysisbuffer (20 mM HEPES, 1 mM CaCl₂, 1 tablet COMPLETE per 50 mL, pH 7,4) vóór homogenisatie in een Polytron handhomogenisator, ultracentrifugatie (40.000× g gedurende 30 min), en resuspensie in bindingsbuffer tot een eiwitconcentratie van 0,25 mg/mL (12,5 μg membraaneiwit wordt gebruikt in elke put van een 96-well plaat). ¹²⁵I-radiolabeld MIP-1α, MIP-1β en RANTES worden bereid en verdund in bindingsbuffer tot een uiteindelijke concentratie van 400 pM in de assay. De verdunningen van deze verbinding worden aan elke put toegevoegd tot een eindvolume van 100 μL, de assayplaten incuberen gedurende 1 uur en de inhoud wordt gefilterd door voor-geblokkeerde en gewassen Unifilter-platen die na een nacht drogen worden geteld.

• Cellijnen

  PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells

• Concentraties

  0-1 μM

• Incubatietijd

  5 days or 7 days

• Methode

  Drug susceptibility assays are performed in 24-well tissue culture plates. Duplicate eight-point dilution series of Maraviroc are prepared in DMSO and medium to yield a final DMSO concentration of 0.1% (vol/vol) in the assay. PHA-stimulated PBMC or PM-1 cells are infected with virus for 1 hour at 37 °C. Cells are subsequently washed once, and 3.6 × 10⁵ PBMC or 2.0 × 10⁵ PM-1 cells are added to each well of assay plates containing diluted this compound. Plates are incubated for 5 days (lab-adapted strains) or 7 days (primary isolates) at 37 °C in a humidified 5% CO₂ (vol/vol) atmosphere.

• Dierlijke modellen

  Humanized BALB/c-Rag2−/−γc−/− and BALB/c-Rag1−/−γc−/− (RAG-hu) mice

• Doseringen

  ~64 μg

• Toediening

  A 25 μL volume of the gel formulation is carefully applied in to the vaginal vault of mice.