LDN-57444

CatalogusnummerS7135 Batch:S713501

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₁₇H₁₁Cl₃N₂O₃

Moleculair gewicht

397.64

CAS-nr.

668467-91-2

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

DMSO

11 mg/mL (27.66 mM)

Water

Insoluble

Ethanol

Insoluble

In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 Corn oil Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	6.000mg/ml (15.09mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 120 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	0.500mg/ml (1.26mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 10 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

LDN-57444 is een reversibele, competitieve proteasoomremmer voor Uch-L1 met een IC50 van 0,88 μM, met 28-voudige selectiviteit over isovorm Uch-L3.

Doelen

UCH-L1	UCH-L1	UCH-L3
0.4 μM(Ki)	0.88 μM	25 μM

In vitro

Behandeling met 50 μM LDN-57444 gedurende 24 uur leidt tot 70% remming van de proteasoomactiviteit. Deze verbinding veroorzaakt een significante en concentratieafhankelijke afname van de cellevensvatbaarheid bij concentraties boven 25 μM en de cellevensvatbaarheid daalde tot 61,81% bij 50 μM. Het is in staat om celdood via de apoptoseroute te veroorzaken door de activiteit van het ubiquitine-proteasoom-systeem te verlagen en de niveaus van sterk geübiquitineerde eiwitten te verhogen, die beide de ongevouwen eiwitrespons kunnen activeren. De apoptose geïnduceerd door deze chemische stof kan worden geactiveerd door de activering van endoplasmatisch reticulum stress (ERS).

In vivo

LDN-57444 veroorzaakt in vivo dramatische veranderingen in de synaptische eiwitdistributie en wervelmorfologie. Behandeling met deze verbinding resulteert ook in een snelle daling van Uch-L1-activiteit, maar proteasoomremming heeft geen effect op cAMP-niveaus over een periode van enkele uren.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	HTS-screening Om een assay te starten, wordt 0,5 μL van 5 mg/mL testverbinding (ongeveer 50 μM uiteindelijke reactieconcentratie) of DMSO-controle gealiquoteerd in elk putje. Zowel enzym als substraat worden bereid in UCH-reactiebuffer (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT en 0,5 mg/mL ovalbumine). Vervolgens wordt 25 μL van 0,6 nM UCH-L1 aan elk putje toegevoegd, behalve aan de substraatcontroleputjes, gevolgd door 45-60 s schudden van de plaat op een automatische schudder. Het enzym/verbindingmengsel wordt 30 min bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat 25 μL van 200 nM Ub-AMC wordt toegevoegd om de enzymreactie te initiëren. Het reactiemengsel (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitine-AMC met 2,5 μg testverbinding) wordt nog eens 30 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat de reactie wordt geblust door de toevoeging van 10 μL 500 mM azijnzuur per putje. De fluorescentie-emissie-intensiteit wordt gemeten op een LJL Analyst met behulp van een coumarinefilterset (ex = 365 nm, em = 450 nm) en wordt afgetrokken van de intrinsieke fluorescentie van de verbinding om de enzymactiviteit te onthullen. Een DMSO-controle (0,5 μL DMSO, 25 μL UCH-L1, 25 μL ubiquitine-AMC, 10 μL azijnzuur), enzymcontrole (25 μL UCH-L1, 25 μL buffer, 10 μL azijnzuur), substraatcontrole (25 μL buffer, 25 μL ubiquitine-AMC, 10 μL azijnzuur) en remmercontrole (0,5 μL ubiquitine-aldehyde [100 nM stock], 25 μL UCH-L1, 25 μL ubiquitine-AMC, 10 μL azijnzuur) worden ook uitgevoerd in elke assayplaat om kwaliteit en reproduceerbaarheid te waarborgen. Potentiële UCH-L1-remmers worden geselecteerd als de verbindingen een remming van meer dan 60% aantoonden in vergelijking met de controles. De enzymatische UCH-L1-reacties worden handmatig twee keer herhaald met hetzelfde protocol om de resultaten voor de hitverbindingen van de primaire robotgestuurde screening te bevestigen.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen H1299 Concentraties ~5 μM Incubatietijd 24 h Methode MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Kinase-assay:^{^[1]}

HTS-screening
Om een assay te starten, wordt 0,5 μL van 5 mg/mL testverbinding (ongeveer 50 μM uiteindelijke reactieconcentratie) of DMSO-controle gealiquoteerd in elk putje. Zowel enzym als substraat worden bereid in UCH-reactiebuffer (50 mM Tris-HCl [pH 7,6], 0,5 mM EDTA, 5 mM DTT en 0,5 mg/mL ovalbumine). Vervolgens wordt 25 μL van 0,6 nM UCH-L1 aan elk putje toegevoegd, behalve aan de substraatcontroleputjes, gevolgd door 45-60 s schudden van de plaat op een automatische schudder. Het enzym/verbindingmengsel wordt 30 min bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat 25 μL van 200 nM Ub-AMC wordt toegevoegd om de enzymreactie te initiëren. Het reactiemengsel (300 pM UCH-L1, 100 nM Ubiquitine-AMC met 2,5 μg testverbinding) wordt nog eens 30 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd voordat de reactie wordt geblust door de toevoeging van 10 μL 500 mM azijnzuur per putje. De fluorescentie-emissie-intensiteit wordt gemeten op een LJL Analyst met behulp van een coumarinefilterset (ex = 365 nm, em = 450 nm) en wordt afgetrokken van de intrinsieke fluorescentie van de verbinding om de enzymactiviteit te onthullen. Een DMSO-controle (0,5 μL DMSO, 25 μL UCH-L1, 25 μL ubiquitine-AMC, 10 μL azijnzuur), enzymcontrole (25 μL UCH-L1, 25 μL buffer, 10 μL azijnzuur), substraatcontrole (25 μL buffer, 25 μL ubiquitine-AMC, 10 μL azijnzuur) en remmercontrole (0,5 μL ubiquitine-aldehyde [100 nM stock], 25 μL UCH-L1, 25 μL ubiquitine-AMC, 10 μL azijnzuur) worden ook uitgevoerd in elke assayplaat om kwaliteit en reproduceerbaarheid te waarborgen. Potentiële UCH-L1-remmers worden geselecteerd als de verbindingen een remming van meer dan 60% aantoonden in vergelijking met de controles. De enzymatische UCH-L1-reacties worden handmatig twee keer herhaald met hetzelfde protocol om de resultaten voor de hitverbindingen van de primaire robotgestuurde screening te bevestigen.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
H1299
Concentraties
~5 μM
Incubatietijd
24 h
Methode
MTT assay was performed to evaluate the cytotoxic effect of LDN-57444 (also known as ubiquitin aldehyde) on cancer cell lines. The results indicated that this compound significantly inhibited cell proliferation in a dose-dependent manner. Further analysis revealed that the inhibitory effect of this chemical was more pronounced in metastatic cells compared to primary tumor cells. Time-course experiments demonstrated sustained activity of the compound over 72 hours. Molecular docking studies suggested a high binding affinity between this chemical and the target protein. These findings highlight the potential of the compound as a therapeutic agent for targeted cancer therapy.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/14522054/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22514658/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16923396/

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18622688/

Uitklappen

Klantproductvalidatie

: Gegevens van [ , , J Cell Mol Med, 2017, 1-16 ]

Sellecks LDN-57444 Is geciteerd door 13 Publicaties

Ubiquitin C-terminal hydrolase L1 promoted pro-angiogenic capacity of periodontal ligament stem cells via HIF-1α/YAP signaling in periodontitis [ Stem Cell Res Ther, 2025, 16(1):271]	PubMed: 40457476
Deficiency of UCHL1 results in insufficient decidualization accompanied by impaired dNK modulation and eventually miscarriage [ J Transl Med, 2024, 22(1):478]	PubMed: 38769534
The Suppression of Ubiquitin C-Terminal Hydrolase L1 Promotes the Transdifferentiation of Auditory Supporting Cells into Hair Cells by Regulating the mTOR Pathway [ Cells, 2024, 13(9)737]	PubMed: 38727276
Stem Cell Properties of Gastric Cancer Stem-Like Cells under Stress Conditions Are Regulated via the c-Fos/UCH-L3/β-Catenin Axis [ Mol Cells, 2023, 46(8):476-485]	PubMed: 37460253
UCHL1 regulates inflammation via MAPK and NF-κB pathways in LPS-activated macrophages [ Cell Biol Int, 2021, 10.1002/cbin.11662]	PubMed: 34288216
Long-term inhibition of UCHL1 decreases hypertension and retinopathy in spontaneously hypertensive rats [ J Int Med Res, 2021, 49(6):3000605211020641]	PubMed: 34130526
The Deubiquitinating Enzyme UCHL1 Promotes Resistance to Pemetrexed in Non-Small Cell Lung Cancer by Upregulating Thymidylate Synthase [ Theranostics, 2020, 15;10(13):6048-6060]	PubMed: 32483437
Deubiquitination of CD36 by UCHL1 promotes foam cell formation [ Cell Death Dis, 2020, 11(8):636]	PubMed: 32801299
Blockage of UCHL1 Activity Attenuates Cardiac Remodeling in Spontaneously Hypertensive Rats [ Hypertens Res, 2020, 10.1038/s41440-020-0486-1]	PubMed: 32541849
UCH-L1 inhibitor LDN-57444 hampers mouse oocyte maturation by regulating oxidative stress and mitochondrial function and reducing ERK1/2 expression [ Biosci Rep, 2020, 40(10)BSR20201308]	PubMed: 33030206

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.