Ivacaftor (VX-770)

Ivacaftor (VX-770) (10 μM) verhoogt de forskoline-gestimuleerde Cl^- secretie (I_T) significant met ~4-voudig met een EC50 van 100 nM in de recombinante Fisher-ratten schildklier (FRT) cellen die de G551D gating mutatie van CFTR tot expressie brengen, en met ~6-voudig met een EC50 van 25 nM in de recombinante cellen die de temperatuur-gecorrigeerde F508del verwerkingsmutatie van CFTR tot expressie brengen. In overeenstemming met de verhogingen van de forskoline-gestimuleerde I_T, verhoogt dit middel de open-waarschijnlijkheid (P_o) van G551D-, F508del- en wild-type CFTR met respectievelijk ~6-voudig, ~5-voudig en ~2-voudig, wat aangeeft dat het direct op CFTR inwerkt om de gating-activiteit ervan te verhogen. In primair gekweekte menselijke CF bronchiale epitheelcellen (HBE) die de G551D en F508del CFTR mutaties dragen, verhoogt Ivacaftor krachtig de forskoline-gestimuleerde I_T met ~10-voudig van 5% tot een maximaal niveau van 48% van dat gemeten in niet-CF HBE, met een EC50 van 236 nM, wat een ~70-voudig hogere potentie vertoont in vergelijking met de veelgebruikte CFTR-potentiator genisteïne, die een EC50 van 16 μM heeft. In HBE met F508del homozygoot CFTR veroorzaakt het een significante toename van de forskoline-gestimuleerde I_T met een EC50 van 22 nM, in mindere mate van 4% tot 16% van niet-CF HBE vergeleken met het effect in G551D/F508del HBE. Vanwege CFTR-potentiëring remt dit middel de overmatige ENaC-gemedieerde Na⁺- en vloeistofabsorptie met een IC50 van 43 nM, en vermindert het de respons, wat resulteert in een toename van de oppervlaktevloeistof en de ciliaire slagfrequentie (CBF) in G551D/F508del HBE. [1]

• Ussing-kameropnames

  Het effect van Ivacaftor (VX-770) op CFTR-gemedieerde Cl^- secretie wordt gekarakteriseerd door de CFTR-gemedieerde I_T te meten in kamers met behulp van recombinante Fisher-ratten schildklier (FRT) cellen die G551D of F508del CFTR tot expressie brengen. Cellen worden gekweekt op Costar Snapwell celkweekinzetstukken die op 37 °C worden gehouden vóór de opname. De celkweekinzetstukken worden gemonteerd in een Ussing-kamer om I_T op te nemen in de voltage-clamp modus (V_hold = 0 mV). Voor FRT-cellen wordt een basolateraal tot apicaal Cl^- gradiënt gecreëerd aan de basolaterale membraan. De basolaterale badoplossing bevat 135 mM NaCl, 1,2 mM CaCl₂, 1,2 mM MgCl₂, 2,4 mM K₂HPO₄, 0,6 mM KHPO₄, 10 mM N-2-hydroxyethylpiperazine-N

• Cellijnen

  FRT and NIH 3T3 cells

• Concentraties

  100/25 nM

• Incubatietijd

  24 h

• Methode

  Cells were treated with various concentrations of Ivacaftor (VX-770).

• Dierlijke modellen

  Male Sprague-Dawley rats

• Doseringen

  3 mg/kg

• Toediening

  i.v.