Capmatinib (INC280)

INCB28060 vertoont picomolaire enzymatische potentie en is zeer specifiek voor c-MET met meer dan 10.000-voudige selectiviteit ten opzichte van een breed panel van menselijke kinasen. Deze verbinding remt de menselijke c-MET-fosforylering en c-MET-gemedieerde signalering in kankercellen. Het remt c-MET-afhankelijke celproliferatie en -overleving, en voorkomt anker-onafhankelijke kankercelgroei en celmigratie. [1]

INCB28060 vertoont sterke antitumoractiviteit in c-MET-afhankelijke muistumormodellen, zelfs orale behandeling met 0,03 mg/kg van deze verbinding veroorzaakt ongeveer 50% remming van c-MET-fosforylering. Dosisafhankelijke remming van tumorgroei wordt waargenomen bij tumordragende muizen. [1]

• c-Met Kinase Test

  De testbuffer bevat 50 mM Tris-HCl, 10 mM MgCl₂, 100 mM NaCl, 0,1 mg/ml BSA, 5mM DTT, pH 7,8. Voor HTS wordt 0,8 μL van 5 mM van deze verbinding, opgelost in DMSO, op 384-wells platen gedruppeld. DMSO-titratie suggereert dat de maximaal getolereerde concentratie van het oplosmiddel 4% is. Om IC50's te meten, wordt de INCB28060-plaat bereid door 3-voudige en 11-punts seriële verdunningen. 0,8 μL van deze chemische stof in DMSO wordt overgebracht van de INCB28060-plaat naar de testplaat. De uiteindelijke concentratie DMSO is 2%. Oplossingen van 8 nM niet-gefosforyleerd c-Met of 0,5 nM gefosforyleerd c-Met worden bereid in testbuffer. Een 1 mM stockoplossing van peptidesubstraat Biotin-EQEDEPEGDYFEWLE-amide, opgelost in DMSO, wordt verdund tot 1 μM in testbuffer die 400 μM ATP (niet-gefosforyleerd c-Met) of 160 uM ATP (gefosforyleerd c-Met) bevat. Een volume van 20 μL enzymoplossing (of testbuffer voor de enzymblank) wordt toegevoegd aan de juiste wells in elke plaat en vervolgens 20 μL/well substraatoplossing om de reactie te starten. De plaat wordt beschermd tegen licht en geïncubeerd bij 25 °C gedurende 90 minuten. De reactie wordt gestopt door toevoeging van 20 μL van een oplossing die 45 mM EDTA, 50 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 0,4 mg/ml BSA, 200 nM SA-APC en 3 nM EUPy20 bevat. De plaat wordt gedurende 15-30 minuten geïncubeerd bij kamertemperatuur en HTRF (homogene tijd-opgeloste fluorescentie) wordt gemeten op een Perkin Elmer Fusion α-FP instrument. De gebruikte HTRF-programma-instellingen zijn als volgt: Primair excitatie filter 330/30, Primair venster: 200 μSec, Primaire vertraging: 50 μSec, Aantal flitsen: 15, Well leestijd: 2000

• Cellijnen

  H441 cells

• Concentraties

  0.24, 1, 4, 16, 63 nM

• Incubatietijd

  24 hours

• Methode

  H441 cells are seeded in RPMI-1640 medium containing 10% FBS and grown to complete confluence. Gaps are introduced by scraping cells with a P200 pipette tip. Cells are then stimulated with 50 ng/mL recombinant human HGF to induce migration across the gap in the presence of various concentrations of this compound. After an overnight incubation, representative photographs are taken and a semiqualitative assessment of inhibition of cell migration is conducted.

• Dierlijke modellen

  Eight-week-old female Balb/c nu/nu mice (Charles River) are inoculated subcutaneously with 4 × 10⁶ tumor cells (S114 model) or with 5 × 10⁶ tumor cells (U-87MG glioblastoma model).

• Doseringen

  3, 10, 30 mg/kg

• Toediening

  INCB28060 is orally dosed, twice each day.