ICG-001

ICG-001 heeft geen effect op het gerelateerde reporterconstruct, FOPFLASH, dat gemuteerde TCF-sites bevat. Na behandeling met 25μM van deze verbinding gedurende 8 uur, vermindert SW480-cel de steady-state niveaus van Survivin en Cycline D1 RNA en eiwit, die beide kunnen worden opgereguleerd door β-catenine. Deze verbinding induceert selectief apoptose in getransformeerde cellen, maar niet in normale coloncellen, en vermindert de in vitro groei van coloncarcinoomcellen. [1] Het kan fenotypisch normale zenuwgroeifactor (NGF)-geïnduceerde neuronale differentiatie en neurietuitgroei redden in de preseniline-1 mutantencellen, wat het belang benadrukt van de TCF/β-catenine signaalroute voor neurietuitgroei en neuronale differentiatie. [2] Een recente studie toont aan dat 5μM van deze chemische stof leptine-geïnduceerde EMT, invasie en tumorsfeerformatie in MCF7-cellen remt. [3]

Toediening van een wateroplosbaar analoog van ICG-001 gedurende 9 weken vermindert de vorming van colon- en dunne darmpoliepen met 42%, even effectief als het niet-steroïde ontstekingsremmende middel, dat consequent werkzaamheid heeft aangetoond in dit model. Gedurende de gehele behandelingsperiode wordt geen duidelijke toxiciteit waargenomen. In het SW620 naakte muis xenograftmodel van tumorregressie, toont 150 mg/kg, i.v. van deze verbinding een dramatische vermindering van het tumorvolume gedurende de 19-daagse behandelingsperiode, zonder mortaliteit of gewichtsverlies. [1] Deze chemische stof (5 mg/kg per dag) remt significant de beta-catenine signalering en vermindert bleomycine-geïnduceerde longfibrose bij muizen, terwijl tegelijkertijd het epitheel behouden blijft. [4]

• DUAL-Luciferase Reporter Assay

  Het Dual-Luciferase Reporter (DLR) Assay System biedt een efficiënte manier om duale reporterassays uit te voeren. In de DLR^TM Assay worden de activiteiten van vuurvlieg (Photinus pyralis) en Renilla (Renilla reniformis, ook bekend als zeepanne) luciferasen sequentieel gemeten uit een enkel monster. De vuurvlieg luciferase reporter wordt eerst gemeten door Luciferase Assay Reagent II (LAR II) toe te voegen om een “glow-type” luminescent signaal te genereren. Na kwantificatie van de vuurvlieg luminescentie, wordt deze reactie gedoofd en wordt de Renilla luciferase reactie geïnitieerd door gelijktijdig Stop & Glo® Reagent aan dezelfde buis toe te voegen. Het Stop & Glo® Reagent produceert ook een “glow-type” signaal van de Renilla luciferase, dat langzaam afneemt gedurende de meting. In het DLR^TM Assay System leveren beide reporters lineaire assays met subattomol (<10-18) gevoeligheden en geen endogene activiteit van een van de reporters in de experimentele gastheercellen. Bovendien biedt het geïntegreerde formaat van de DLR^TM Assay een snelle kwantificatie van beide reporters, hetzij in getransfecteerde cellen of in celvrije transcriptie/translatie reacties.

• Cellijnen

  Human colon carcinoma cell lines SW480, SW620, and HCT116, normal colonic epithelial cell line CCD-841Co

• Concentraties

  ~25 μM

• Incubatietijd

  24 hours

• Methode

  1. Prior to starting the assay, prepare the Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent, and mix thoroughly. 2. For best results, empirical determination of the optimal cell number, apoptosis induction treatment and incubation period for the cell culture system may be necessary. 3. Use identical cell numbers and volumes for the assay and the negative control samples. 4. Do not mix Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent and samples by manual pipetting. Mixing in this manner is unnecessary and may create bubbles that interfere with fluorescence readings or cross-contaminate the samples. Gentle mixing may be performed using a plate shaker. 5. Total incubation time for the assay depends upon the amount of caspase- 3/7 present in the sample. 6. The Apo-ONE Caspase-3/7 Reagent is formulated to mediate cellular lysis and support optimal caspase-3/7 activity. In rare instances, the reagent does not affect complete lysis of cultured cells. In such cases, lysis is enhanced by a freeze-thaw cycle. For best results, freeze at -70 °C, then thaw at room temperature. After equilibration, mix to homogeneity and incubate until measurable fluorescence is achieved

• Dierlijke modellen

  C57BL/6 and nude mice tumor models

• Doseringen

  20 mg/ kg

• Toediening

  i.p.