GW9662

GW9662 bindt aan Cys(285) op PPARgamma, wat geconserveerd is onder alle drie de PPAR's. Deze verbinding werkt als een antagonist van PPARgamma, wat bevestigd wordt in een assay van adipocytendifferentiatie-inhibitie. [1] Het voorkomt activering van PPARγ en remt de groei van menselijke mamma tumorcellijnen (MCF7, MDA-MB-468, MDA-MB-231) met een IC50 van 20 μM-30 μM, wat suggereert dat er ofwel agonistische eigenschappen van PPARγ van deze chemische stof bestaan, of groeiremmende mechanismen die onafhankelijk zijn van PPARγ. Co-behandeling met deze verbinding (10 μM) resulteert in statistisch lagere aantallen levensvatbare cellen na 7 dagen in MDA-MB-231 cellen. [2] PPARγ1-liganden kunnen RANKL-geïnduceerde osteoclastvorming onderdrukken in primaire muizenmyeloïde (BMs) en RAW264.7-cellen. Belangrijk is dat de onderdrukking door deze liganden op een concentratie-afhankelijke manier wordt omgekeerd met deze chemische stof (2 μM). Het (2 μM) blokkeert IL-4 onderdrukking van osteoclastvorming in BMs. Deze verbinding (1 μM) blokkeert RANKL-activering van NF-κB in RAW264.7-cellen. [3] GW9662 (10 μM) remt hormoon- en agonist-geïnduceerde adipogenese van primaire preadipocyten van patiënten met schildklieroogziekte. [4]

Voorbehandeling met LPS (1 mg/kg i.p.) vermindert significant alle markers van nierbeschadiging en -disfunctie veroorzaakt door ischemie/reperfusie (I/R) letsel bij ratten. Met name deze verbinding (1 mg/kg i.p.) heft de beschermende effecten van LPS op. [5]

• Bindingsassay

  De humane PPARα, PPARγ en PPARδ ligandbindingsdomeinen (LBD's) worden in E. coli tot expressie gebracht als polyhistidine-gelabelde fusie-eiwitten. Receptoren worden geïmmobiliseerd op SPA-kralen door toevoeging van de gewenste receptor (15 nM) aan een slurry van streptavidine-gemodificeerde SPA-kralen (0,5 mg/mL) in assaybuffer. Het mengsel wordt ten minste 1 uur bij kamertemperatuur geëquilibreerd, waarna de kralen worden gepelleteerd door centrifugatie bij 1×10³ g. De bovenstaande vloeistof wordt verwijderd en de kralen worden opnieuw gesuspendeerd in het oorspronkelijke volume verse assaybuffer met voorzichtig mengen. De centrifugatie-/resuspensieprocedure wordt herhaald, en de resulterende slurry van met receptoren gecoate kralen wordt onmiddellijk gebruikt of tot 1 week bij 4 ℃ bewaard voor gebruik. [3H]GW2443 worden gebruikt als radioliganden voor de bepaling van competitieve binding aan respectievelijk PPARα, PPARγ en PPARδ. Tenzij anders aangegeven, is de buffer die voor alle assays wordt gebruikt 50 mM HEPES (pH 7), 50 mM NaCl, 5 mM CHAPS, 0,1 mg/mL BSA en 10 mM DTT. Voor sommige experimenten wordt de HEPES (pH 7) vervangen door 50 mM Tris (pH 8).

• Cellijnen

  MDA-MB-231 cells

• Concentraties

  10 μM

• Incubatietijd

  10 days

• Methode

  MDA-MB-231 cells are seeded at a density of 1 × 10⁵ cells per 25 cm³ tissue culture flask. After 24 h (day 0), the growth medium is replaced with fresh medium containing GW9662 (10 μM) or both together. Control flasks receives 0.1% DMSO. Cells are harvested on days 0, 3, 5, 7, 10 for each treatment condition by trypsinisation, stained using trypan blue, and the total and viable number of cells per flask calculates using a haemocytometer.

• Dierlijke modellen

  male Wistar rats

• Doseringen

  1 mg/kg

• Toediening

  intraperitoneal injection