GSK3787

GSK3787 antagoniseert irreversibel humaan en muis PPARδ dat Cys249 binnen de ligandbindingspocket covalent modificeert. Deze verbinding (1 μM) antagoniseert effectief de door agonist GW0742 gestimuleerde transcriptie van CPT1a en PDK4 in humane skeletspiercellen, en antagoniseert effectief de basale genexpressie van CPT1a. Het vertoont geen effectieve antiproliferatieve activiteit tegen colorectale kankercellen. [1]

Deze chemische stof (1 μM) antagoniseert volledig de door 50 nM GW0742 geïnduceerde PPARβ/δ-afhankelijke Angptl4 genexpressie in wildtype fibroblasten en in keratinocyten. Het (1 μM) antagoniseert grotendeels de door 50 nM GW0742 geïnduceerde Angptl4 en Adrp mRNA's expressie in huidkankercel A341. Dit compound (1 μM) antagoniseert grotendeels de door GW0742 geïnduceerde Angptl4 mRNA's expressie in kankercellijnen MCF7 (borst), Huh7 (lever) en HepG2 (lever) cellen, maar niet in H1838 of A549 cellen (long). Het (1 μM) antagoniseert grotendeels de door GW0742 geïnduceerde toename van Adrp mRNA in Huh7 en HepG2 cellen, maar niet in H1838 cellen. Deze chemische stof antagoniseert de basale expressie van geen van deze twee PPARβ/δ doelgenen in deze cellen. Noch GW0742, noch dit compound heeft enig effect op de celproliferatie van deze cellen bij concentraties variërend van 0,1 tot 10 μM. Het is in staat om de associatie van zowel PPARβ/δ als PPARγ coregulator peptiden te moduleren als reactie op ligandactivatie. De werkzaamheid van deze chemische stof om de PPARγ activiteit te moduleren is aanzienlijk lager dan de werkzaamheid ervan als PPARβ/δ antagonist. [2]

GSK3787 antagoniseert ligand-geïnduceerde PPARβ/δ-afhankelijke genexpressie in vivo. Orale toediening van dit compound heeft geen effect op de expressie van Angptl4- en Adrp-mRNA in het muis-colon-epitheel. Gelijktijdige toediening van deze chemische stof (10 mg/kg) voorkomt effectief de door GW0742 geïnduceerde expressie van zowel Angptl4 als Adrp mRNA in wildtype muis-colon-epitheel, wat gecorreleerd is met een verminderde promotorbezetting van PPARβ/δ op de Angptl4- en Adrp-genen. Toediening van dit compound had geen effect op de glucosetolerantie. [2]

• verzadigingsbindingsassay

  Met behulp van 96-wells kweekplaten worden 50 nM gezuiverd humaan PPARG LBD en de gewenste concentratie van [³H]GW3738 verdund tot een totaal volume van 100 μL met buffer bestaande uit 50 mM KCl, 5 mM EDTA, 10 mM dithiothreitol (DTT), 50 mM HEPES, bij pH 7. Verzadigingsbindingsassays worden uitgevoerd met concentraties van deze verbinding variërend van 1 tot 250 nM. Niet-specifieke binding bij elke concentratie van [³H]GW3738 wordt geschat in parallelle incubaties die 50 μM ongelabeld GW 3738 bevatten. Platen worden gedurende 2 uur bij kamertemperatuur geïncubeerd. Vrije ligand wordt gescheiden van aan de receptor gebonden ligand door grootte-uitsluitingschromatografie met behulp van commercieel verkrijgbare 96-wells formaat spinkolommen. Monsters (50 μL) van elk well van een enkele testplaat worden geladen op een met buffer en temperatuur geëquilibreerd 96-wells gelfiltratieblok. Het blok wordt bovenop een schone microtiterplaat geplaatst en gedurende 4 minuten bij 1100 g gecentrifugeerd. Scintillatievloeistof (180 μL) wordt toegevoegd aan elk well van de plaat die het eluaat bevat, en de platen worden verzegeld en minimaal 4 uur geëquilibreerd voordat ze in een teller worden geteld. De hoeveelheid niet-specifieke binding bij elke concentratie van [³H]GW3738 wordt van alle wells afgetrokken en grafieken van de chemische concentratie versus gebonden tellingen per minuut (cpm) worden geconstrueerd. De K_d-waarden voor [³H]GW3738 worden bepaald uit een niet-lineaire kleinste-kwadratenfit van de gegevens aan een eenvoudig bindingsmodel.