Fludarabine

Fludarabine remt efficiënt de proliferatie van RPMI 8226 cellen met een IC50 van 1,54 μg/mL. De IC50 van deze verbinding tegen MM.1S en MM.1R cellen is respectievelijk 13,48 μg/mL en 33,79 μg/mL. Daarentegen zijn U266 cellen resistent tegen deze chemische stof met een IC50 van 222,2 μg/mL. Deze verbinding leidt tot een verhoogd aantal cellen in de G1-fase van de celcyclus, vergezeld van een gelijktijdige reductie van cellen in de S-fase van de celcyclus op een tijdsafhankelijke manier. Het induceert een celcyclusblokkade en triggert apoptose in MM-cellen. Het triggert tijdsafhankelijke splitsing van caspase-8, -9 en -3, -7, gevolgd door PARP-splitsing. Het verhoogt de expressie van Bax op een tijdsafhankelijke manier, terwijl de expressie van Bak niet verandert. Na blootstelling aan deze chemische stof gedurende 12 uur vertonen RPMI 8226 cellen een verlies van membraanpotentiaal, waarbij 61,05% van de cellen lage fluorescentie van rhodamine 123 vertoont, vergeleken met 8,62% van de cellen in de onbehandelde controle. [1] Om de oplosbaarheid te verbeteren, wordt het geformuleerd als het monofosfaat (F-ara-AMP, fudarabine), dat onmiddellijk en kwantitatief gedefosforyleerd wordt tot het moedernucleoside bij intraveneuze infusie. Binnen de cellen vindt herfosforylatie plaats, wat leidt tot fuoroadenine arabinoside trifosfaat (F-ara-ATP), de belangrijkste cytotoxische metaboliet van F-ara-A. [2] Het kan ook pro-inflammatoire stimulatie van monocytaire cellen induceren, zoals geëvalueerd door verhoogde expressie van ICAM-1 en IL-8 afgifte. [3] Deze verbinding beïnvloedt de groei van eierstokkankercellijnen niet, terwijl het een duidelijke en dosisafhankelijke remming van proliferatie in melanoomcellijnen induceert. [4] Het is een remmer van STAT1 die STAT1 specifiek vermindert zonder andere STAT-familieleden te beïnvloeden[5]. Naast cytoplasmatische accumulatie induceert herhaaldelijk laaggedoseerd cisplatine (RLDC) HMGB1-expressie, die sterk wordt onderdrukt door STAT1-knockdown. Consistent onderdrukt deze chemische stof HMGB1-expressie tijdens RLDC-behandeling dosisafhankelijk in RLDC-behandelde nierbuiscellen[5].

Tumoren behandeld met PBS groeien snel tot ongeveer 10 keer hun oorspronkelijke volume in 25 dagen, terwijl de tumoren in de Fludarabine bij 40 mg/kg minder dan 5 keer toenemen. Een significant antitumor effect van 40 mg/kg van deze verbinding op RPMI8226 tumorgroei wordt aangetoond. RPMI8226 tumoren behandeld met 40 mg/kg van deze chemische stof op dag 10 vertonen een toename van apoptotische kernen. Deze verbinding is effectief in het onderdrukken van RPMI8226 myeloom xenografts in SCID muizen. [1]

• Cellijnen

  Dexamethasone-sensitive (MM.1S) and -resistant (MM.1R) human MM cell lines, RPMI8226 and U266 cell lines

• Concentraties

  2 μg/mL

• Incubatietijd

  24 hours

• Methode

  After treated with Fludarabine or control, dexamethasone-sensitive (MM.1S) and -resistant (MM.1R) human MM cell lines, RPMI8226 and U266 cell lines (5 × 10⁵ cells) are washed twice in phosphate-buffered saline (PBS) and fixed with 70% ice-cold ethanol, then centrifuged and suspended in PBS containing 100 μg/mL RNase A. After incubated for 30 minutes at 37 ºC, samples are resuspended in 25 μg/mL propidium iodide. Flow cytometry is performed on a FACSCalibur automated system. Apoptosis is determined by Annexin V-FITC apoptosis detection kit, according to the manufacturer's instructions. For TUNEL (terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling) assay, cells are analyzed by flow cytometry using the in situ cell death detection kit.

• Dierlijke modellen

  Severe combined immunodeficient (SCID) mice bearing RPMI 8226 cells

• Doseringen

  40 mg/kg

• Toediening

  Administered via i.p.