Erlotinib (CP-358774)

Erlotinib HCl remt potent de EGFR-activering in intacte cellen, waaronder menselijke HNS hoofd- en nek-tumorcellen (IC50 20nM), DiFi menselijke darmkankercellen en MDA MB-468 menselijke borstkankercellen. Deze verbinding (1 μM) induceert apoptose in DiFi menselijke darmkankercellen. [1] Het remt de groei van een panel van NSCLC-cellijnen, waaronder A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 met IC50 variërend van 29 nM tot >20 μM. [2] Deze chemische stof (2 μM) remt significant de groei van AsPC-1 en BxPC-3 pancreascellen. [3] De effecten van deze verbinding in combinatie met gemcitabine worden als additief beschouwd in KRAS-gemuteerde pancreas kankercellen. Tien micromolair van deze chemische stof remt EGFR-fosforylatie op de Y845 (Src-afhankelijke fosforylatie) en Y1068 (autofosforylatie) sites. [4] Combinatie met deze verbinding kan rapamycine-gestimuleerde Akt-activiteit down-moduleren en produceert een synergetisch effect op de remming van celgroei. [5]

Bij doses van 100 mg/kg voorkomt Erlotinib HCl volledig EGF-geïnduceerde autofosforylatie van EGFR in menselijke HN5-tumoren die als xenotransplantaten in athymische muizen groeien en van het hepatische EGFR van de behandelde muizen. [1] Deze verbinding (100 mg/Kg) remt H460a en A549 tumormodellen met een remmingspercentage van 71 en 93%. [5]

• Kinase-assays

  96-well platen worden gecoat door 's nachts bij 37 °C te incuberen met 100 μL per well van 0,25 mg/mL PGT in PBS. Overtollig PGT wordt verwijderd door aspiratie, en de plaat wordt 3 keer gewassen met wasbuffer (0,1% Tween 20 in PBS). De kinase-reactie wordt uitgevoerd in 50 μL 50 mM HEPES (pH 7,3), bevattende 125 mM natriumchloride, 24 mM magnesiumchloride, 0,1 mM natriumorthovanadaat, 20 μM ATP, 1,6 μg/mL EGF, en 15 ng EGFR, affiniteitsgezuiverd uit A431 celmembranen. Erlotinib HCl in DMSO wordt toegevoegd om een uiteindelijke DMSO-concentratie van 2,5% te geven. Fosforylatie wordt geïnitieerd door toevoeging van ATP en gedurende 8 minuten bij kamertemperatuur voortgezet, met constant schudden. De kinase-reactie wordt beëindigd door aspiratie van het reactiemengsel en 4 keer gewassen met wasbuffer. Gefosforyleerd PGT wordt gemeten door 25 minuten incubatie met 50 μL per well HRP-geconjugeerde PY54 anti-fosfotyrosine antilichaam, verdund tot 0,2 μg/mL in blokkeerbuffer (3% BSA en 0,05% Tween 20 in PBS). Antilichaam wordt verwijderd door aspiratie, en de plaat wordt 4 keer gewassen met wasbuffer. Het colorimetrische signaal wordt ontwikkeld door toevoeging van TMB Microwell Peroxidase Substrate, 50 μL per well, en gestopt door toevoeging van 0,09 M zwavelzuur, 50 μL per well. Fosfotyrosine wordt geschat door meting van de absorptie bij 450 nm. Het signaal voor controles is typisch 0,6-1,2 absorptie-eenheden, met in wezen geen achtergrond in wells zonder AlP, EGFR of PGT en is evenredig met de incubatietijd gedurende 10 minuten.

• Cellijnen

  A549, H322, H3255, H358 H661, H1650, H1975, H1299, H596 cells

• Concentraties

  30 nM-20 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Exponentially growing cells are seeded in 96-well plastic plates and exposed to serial dilutions of erlotinib, pemetrexed, or the combination at a constant concentration ratio of 4:1 in triplicates for 72 h. Cell viability is assayed by cell count and the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Growth inhibition is expressed as the percentage of surviving cells in drug-treated versus PBS-treated control cells (which is considered as 100% viability). The IC50 value is the concentration resulting in 50% cell growth inhibition by a 72-h exposure to this compound compared with untreated control cells and is calculated by the CalcuSyn software.

• Dierlijke modellen

  Male 5-week-old BALB-nu/nu mice with HPAC cells

• Doseringen

  50 mg/kg

• Toediening

  Oral administration