Datasheet

Biologische Beschrijving

Specificiteit	E.coli LPS Antibody [M15H2] detecteert specifiek E.coli LPS.
Achtergrond	E. coli LPS (lipopolysaccharide) vormt het primaire structurele component en krachtige endotoxine van de Gram-negatieve bacteriële buitenmembraan, bestaande uit Lipide A, kernoligosaccharide en O-antigeen die gezamenlijk de membraanintegriteit handhaven en tevens dienen als het krachtigste bekende immunostimulerende molecuul. Lipide A verankert als een bifosforyleerd β-1',6-glucosamine disaccharide geacyleerd met zes vetzuurketens die het toxische deel vormen dat wordt herkend door het gastheer TLR4-MD-2-CD14 receptorcomplex, terwijl het kerngebied via Kdo-heptose suikers met geladen fosfaat/ethanolamine groepen voor membraanstabilisatie is verbonden, en de zeer variabele O-antigeen polysacharideketen van herhalende epitopen serotypespecificiteit en immuunontwijking verleent via fagocytose/complementresistentie, waardoor een "gladde" bacteriële morfologie ontstaat. LPS vormt een essentiële permeabiliteitsbarrière die beschermt tegen galzouten, antibiotica en kationische peptiden, terwijl het een catastrofale aangeboren immuunactivatie triggert via MyD88/TRIF-afhankelijke NF-κB- en IRF3-routes die leiden tot massale TNF-α, IL-1β, IL-6 cytokinestormen die septische shock, gedissemineerde intravasculaire coagulatie en multiorgaanfalen veroorzaken tijdens Gram-negatieve bacteriëmie; chronische laaggradige endotoxemie door darmtranslocatie draagt via aanhoudende vasculaire ontsteking bij aan atherosclerose, neurodegeneratieve ziekten en metabool syndroom, waardoor LPS zowel een onmisbaar bacterieel structureel element als 's werelds gevaarlijkste microbiële toxine is.

Specificiteit

E.coli LPS Antibody [M15H2] detecteert specifiek E.coli LPS.

Achtergrond

E. coli LPS (lipopolysaccharide) vormt het primaire structurele component en krachtige endotoxine van de Gram-negatieve bacteriële buitenmembraan, bestaande uit Lipide A, kernoligosaccharide en O-antigeen die gezamenlijk de membraanintegriteit handhaven en tevens dienen als het krachtigste bekende immunostimulerende molecuul. Lipide A verankert als een bifosforyleerd β-1',6-glucosamine disaccharide geacyleerd met zes vetzuurketens die het toxische deel vormen dat wordt herkend door het gastheer TLR4-MD-2-CD14 receptorcomplex, terwijl het kerngebied via Kdo-heptose suikers met geladen fosfaat/ethanolamine groepen voor membraanstabilisatie is verbonden, en de zeer variabele O-antigeen polysacharideketen van herhalende epitopen serotypespecificiteit en immuunontwijking verleent via fagocytose/complementresistentie, waardoor een "gladde" bacteriële morfologie ontstaat. LPS vormt een essentiële permeabiliteitsbarrière die beschermt tegen galzouten, antibiotica en kationische peptiden, terwijl het een catastrofale aangeboren immuunactivatie triggert via MyD88/TRIF-afhankelijke NF-κB- en IRF3-routes die leiden tot massale TNF-α, IL-1β, IL-6 cytokinestormen die septische shock, gedissemineerde intravasculaire coagulatie en multiorgaanfalen veroorzaken tijdens Gram-negatieve bacteriëmie; chronische laaggradige endotoxemie door darmtranslocatie draagt via aanhoudende vasculaire ontsteking bij aan atherosclerose, neurodegeneratieve ziekten en metabool syndroom, waardoor LPS zowel een onmisbaar bacterieel structureel element als 's werelds gevaarlijkste microbiële toxine is.

Gebruiksinformatie

Toepassing

IF, ELISA

Verdunning

IF

1:200

Reactiviteit

Escherichia coli

Bron

Mouse Monoclonal Antibody

MW

Opslagbuffer

PBS, pH 7.2+50% Glycerol+0.05% BSA+0.01% NaN3

Opslag
(Vanaf de datum van ontvangst)

-20°C (avoid freeze-thaw cycles), 2 years

Experimentele Methoden
IF	Experimental Protocol: Sample Preparation 1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use. 2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine. 3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time. 4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval. Fixation 1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes. 2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Permeabilization 1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes. (Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.) Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time. Blocking Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.) Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background. Immunofluorescence Staining (Day 1) 1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody. 2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight. Immunofluorescence Staining (Day 2) 1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours. 3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. 4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes. 5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time. Mounting 1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium. 2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark. 3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

Experimentele Methoden

IF

Experimental Protocol:

Sample Preparation

1. Adherent Cells: Place a clean, sterile coverslip in a culture dish. Once the cells grow to near confluence as a monolayer, remove the coverslip for further use.

2. Suspension Cells: Seed the cells onto a clean, sterile slide coated with poly-L-lysine.

3. Frozen Sections: Allow the slide to thaw at room temperature. Wash it with pure water or PBS for 2 times, 3 minutes each time.

4. Paraffin Sections: Deparaffinization and rehydration. Wash the slide with pure water or PBS for 3 times, 3 minutes each time. Then perform antigen retrieval.

Fixation

1. Fix the cell coverslips/spots or tissue sections at room temperature using a fixative such as 4% paraformaldehyde (4% PFA) for 10-15 minutes.

2. Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Permeabilization

1.Add a detergent such as 0.1–0.3% Triton X-100 to the sample and incubate at room temperature for 10–20 minutes.

(Note: This step is only required for intracellular antigens. For antigens expressed on the cell membrane, this step is unnecessary.)

Wash the sample with PBS for 3 times, 3 minutes each time.

Blocking

Add blocking solution and incubate at room temperature for at least 1 hour. (Common blocking solutions include: serum from the same source as the secondary antibody, BSA, or goat serum.)

Note: Ensure the sample remains moist during and after the blocking step to prevent drying, which can lead to high background.

Immunofluorescence Staining (Day 1)

1. Remove the blocking solution and add the diluted primary antibody.

2. Incubate the sample in a humidified chamber at 4°C overnight.

Immunofluorescence Staining (Day 2)

1. Remove the primary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

2. Add the diluted fluorescent secondary antibody and incubate in the dark at 4°C for 1–2 hours.

3. Remove the secondary antibody and wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

4. Add diluted DAPI and incubate at room temperature in the dark for 5–10 minutes.

5. Wash with PBST for 3 times, 5 minutes each time.

Mounting

1. Mount the sample with an anti-fade mounting medium.

2. Allow the slide to dry at room temperature overnight in the dark.

3. Store the slide in a slide storage box at 4°C, protected from light.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23372159/
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/30066669/

E.coli LPS Antibody [M15H2]

Biologische Beschrijving

Gebruiksinformatie

Referenties

Toepassingsgegevens