Dynasore

Dynasore fungeert als een krachtige remmer van endocytische routes die bekend staan afhankelijk te zijn van dynamin door de vorming van gecoate blaasjes binnen enkele seconden na toevoeging snel te blokkeren. Twee typen gecoate pit-intermediairen accumuleren tijdens de behandeling met deze verbinding: U-vormige, halfgevormde pits en O-vormige, volledig gevormde pits, vastgelegd tijdens het afknijpen. Deze chemische stof, in een concentratie van 80 μM, remt ook de enzymatische activiteit van het mitochondriale dynamin Drp1. Het blokkeert sterk de opname, het transport en de intracellulaire accumulatie van transferrine in HeLa-cellen met een IC50 van ~15 μM. Het voorkomt ook de endocytose van low-density lipoproteïne en choleratoxine. Deze verbinding (80 μM) verstoort sterk de verspreiding van vers geplate cellen en remt de migratie van BSC1-cellen met ongeveer 50%. [1]

Het blokkeert endocytose in gekweekte hippocampa neuronen volledig en reversibel na aanhoudende of korte actiepotentiaalstimuli met volledige remming bij 80 μM en een halfmaximale remming bij ~30 μM. In aanwezigheid van deze remmer leidt laagfrequente stimulatie tot een aanhoudende accumulatie van synaptopHluorine en andere vesiculaire eiwitten op het oppervlaktemembraan met een snelheid die wordt voorspeld door netto exocytose, evenals een vermindering van de dichtheid van synaptische blaasjes en de aanwezigheid van endocytische structuren alleen bij synapsen. [2]

Het kan de infectie van menselijke epitheelcellen HEK 293 door humaan papillomavirus type 16 en bovien papillomavirus type 1 pseudovirions blokkeren met een gelijke IC50 van ~80 μM, wat gedeeltelijk reversibel is. [3]

• GTPase activiteitsassay

  GTPase-activiteit wordt gemeten met behulp van een radioactieve, op houtskool gebaseerde assay. Eiwitten dynamin, humaan Drp1 in de aangegeven concentraties worden geïncubeerd in 10 mM Tris (pH 7,2), 2 mM MgCl₂ en 20 μM GTPγP³² (2000 dpm/pmol) alleen of, indien van toepassing, met lipidenanoröhren voor de aangegeven tijden en temperaturen; de uiteindelijke NaCl-concentratie is 150 mM NaCl voor de hoge-zoutconditie en tussen 10 en 20 mM voor de lage-zoutcondities, afhankelijk van de eiwitconcentratie in de stockoplossing. De GTP-hydrolyse wordt beëindigd door 10 μL aliquots van de reactie over te brengen naar een 500 μL slurry die zuurgewassen houtskool bevat, gevolgd door 10 min centrifugatie (20000 × g, 4 ℃) en het uiteindelijke tellen van de vrijgekomen P³²O₄ in 250 μL supernatant.

• Dierlijke modellen

  Female Sprague–Dawley rats

• Doseringen

  1, 10, or 30 mg/kg

• Toediening

  i.p.