Derazantinib

ARQ-087 heeft een antiproliferatieve activiteit in cellijnen die worden aangedreven door FGFR-dysregulatie, inclusief amplificaties, fusies en mutaties. Celcyclusstudies in cellijnen met hoge niveaus van FGFR2-eiwit tonen een positieve relatie aan tussen ARQ 087-geïnduceerde G1-celcyclusarrest en daaropvolgende inductie van apoptose. ARQ 087 remt de autofosforylering van FGFR1 en FGFR2 op een dosisafhankelijke manier. In Cos-1-cellen die volledige lengte FGFR1, FGFR2, FGFR3 en FGFR4 overexpressen, remt ARQ 087 hun fosforylering met EC50-waarden van respectievelijk < 0,123 μM, 0,185 μM, 0,463 μM, >10 μM. ARQ 087 remt FGFR-kinase via een ATP-competitief mechanisme en is in staat om zowel de inactieve als de volledig actieve vormen van de FGFR-kinase te remmen. Vandaar dat ARQ 087 de FGFR-activering vertraagt door de autofosforylering ervan te remmen, evenals de remming van de gefosforyleerde actieve kinase[1].

ARQ 087 vermindert de FGFR-signalering in SNU-16 menselijke xenografttumoren, wat leidt tot een reductie in fosfo-FGFR, fosfo-FRS2-α en fosfo-ERK, terwijl het totale FGFR2-eiwit onaangetast blijft. ARQ 087 is effectief in het remmen van tumor groei in vivo in FGFR2-veranderde SNU-16 en NCI-H716 xenograft-tumormodellen met genamplificaties en fusies. ARQ 087 toonde werkzaamheid in meerdere in vivo xenograft-modellen en werd goed verdragen bij doses tot 75 mg/kg[1].

• Bepaling van Ki en de wijze van remming

  De kinase-remmende activiteit van ARQ 087 werd bepaald voor de recombinante FGFR1- of FGFR2-eiwitten met behulp van een gebiotinyleerd PYK2-peptide-substraat en ATP. ARQ 087 werd getitreerd in DMSO met behulp van een 3-voudige verdunningsreeks, en vervolgens 10-voudig verder verdund in gedeïoniseerd water voor een uiteindelijke DMSO-concentratie van 10%. Een volume (2,5 μL) van deze verdunningen of vehikel werd toegevoegd aan elke put van een reactieplaat. FGFR1 of FGFR2 werd toegevoegd aan analysebuffer (50 mM Tris, pH 8,0, 0,02 mg/mL BSA, 10 mM MgCl2, 1 mM EGTA, 10% glycerol, 0,1 mM Na3PO4, 1 mM DTT) in elke put in een volume van 17,5 μL voor een uiteindelijke concentratie van respectievelijk 0,50 of 0,25 nM. Na een voorincubatieperiode van 30 minuten werden ATP en substraat toegevoegd in analysebuffer (5 μL) voor uiteindelijke concentraties van 0–1.000 μM ATP en 80 nM gebiotinyleerd-PYK2, voor een uiteindelijke reactievolume van 25 μL. De platen werden 60 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd en vervolgens in het donker gestopt door de toevoeging van 10 μL stop/detectiemengsel bereid in analysebuffer dat EDTA, AlphaScreen™ Streptavidin Donor en P-TYR-100 Acceptor kralen bevatte voor uiteindelijke concentraties van 10 mM EDTA en 500 ng/put van zowel AlphaScreen™ Donor- als Acceptor kralen. Analyseplaten werden 60 minuten bij kamertemperatuur in het donker geïncubeerd, en de platen werden afgelezen op een Perkin Elmer, Envision Multilabel plaatlezer. (excitatiegolflengte: 640 nm, emissiegolflengte: 570 nm). Het effect van enzymconcentratie werd toegepast voor strak bindende remmers, en indien nodig werden de IC50-waarden omgezet in Ki-waarden als de enzymconcentratie boven de IC50-waarden lag onder de gebruikte analyseomstandigheden.

• Cellijnen

  NCI-H716 and SNU-16 cells

• Concentraties

  0.1 μM or 1 μM

• Incubatietijd

  24 or 72 hours

• Methode

  Cells are plated and incubated at 37°C overnight and subsequently treated with 0.1 μM or 1 μM of ARQ 087 for 24 or 72 hours. The cells were fixed and stained with Cycletest Plus Reagent kit and cell cycle profiles were analyzed using a FACS Calibur flow cytometer.

• Dierlijke modellen

  female NCr nu/nu mice (SNU-16) or CB17 SCID mice (NCI-H716)

• Doseringen

  0, 25, 50, and 75 mg/kg

• Toediening

  oral administration