DAPT

CatalogusnummerS2215 Batch:S221508

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C23H26F2N2O4
Moleculair gewicht 432.46 CAS-nr. 208255-80-5
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 86 mg/mL (198.86 mM)
Ethanol 39 mg/mL (90.18 mM)
Water Insoluble
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving DAPT is een nieuwe γ-secretase remmer, die de Aβ-productie remt met een IC50 van 20 nM in HEK 293-cellen. DAPT versterkt de apoptosis van menselijke tongcarcinoomcellen en reguleert autophagy.
Doelen
Notch Aβ
(HEK 293 cells)
20 nM
In vitro In menselijke primaire neuronale culturen vertoont DAPT ook remmende effecten op de Aβ-productie met een IC50 van respectievelijk 115 nM en 200 nM voor totaal Aβ en Aβ42, wat 5-10 keer lager is dan waargenomen in HEK 293-cellen. Een recente studie toont aan dat deze verbinding de proliferatie van SK-MES-1-cellen op een concentratie-afhankelijke manier remt met een IC50 van 11,3 μM. Bovendien induceert het ook caspase-afhankelijke en caspase-onafhankelijke apoptosis in long plaveiselcelcarcinoomcellen door de Notch-receptorsignaleringsroute te remmen.
In vivo DAPT-toediening (100 mg/kg) leidt tot een robuust en aanhoudend farmacodynamisch effect bij PDAPP-muizen, waarbij de niveaus van deze verbinding in de hersenen binnen 1 uur meer dan 100 ng/g bedragen en tot 18 uur na toediening aanhouden, met piekniveaus van 490 ng/g waargenomen na 3 uur. Gedurende deze periode verlaagt deze chemische stof (100 mg/kg) ook het corticale totale Aβ en Aβ42 op een dosisafhankelijke manier met een reductie van 50%. In rattenhersenbalken onderdrukt deze verbinding (40 mg/kg) de LPS-geïnduceerde activiteit van γ-secretase en verhoogt het de celapoptose met de langdurige neuro-inflammatie.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[1]
  • In vitro Aβ-reductieassays

    Menselijke embryonale niercellen (American Type Culture Collection CRL-1573), getransfecteerd met het gen voor APP751 (HEK 293) worden gebruikt voor routinematige Aβ-reductieassays. Cellen worden geplateerd in 96-wells platen en 's nachts geadheerd in Dulbecco's gemodificeerde Eagle medium (DMEM) aangevuld met 10% hitte-geïnactiveerd foetaal runderserum. DAPT wordt verdund uit stockoplossingen in dimethylsulfoxide (DMSO) om een uiteindelijke concentratie van 0,1% DMSO in het medium te verkrijgen. Cellen worden 2 uur lang bij 37 °C voorbehandeld met deze verbinding, media worden afgezogen en verse compoundoplossingen worden aangebracht. Na een extra behandelingsperiode van 2 uur wordt geconditioneerd medium afgenomen en geanalyseerd met een sandwich-ELISA (266–3D6) specifiek voor totaal Aβ. Reductie van Aβ-productie wordt gemeten ten opzichte van controlecellen behandeld met 0,1% DMSO en uitgedrukt als een percentage remming. Gegevens van ten minste zes doses in duplo worden aangepast aan een vierparameter logistisch model met behulp van XLfit-software om de potentie te bepalen. Menselijke en PDAPP-muis neuronale culturen worden gekweekt in serumvrije media om hun neuronale kenmerken te verbeteren, en bleken na rijping meer dan 90% neuronen te zijn voorafgaand aan gebruik. Geconditioneerde media om baseline Aβ-waarden vast te stellen, worden verzameld door vers medium aan elke put toe te voegen en gedurende 24 uur bij 37 °C te incuberen zonder deze chemische stof. Culturen worden vervolgens behandeld met vers medium dat deze verbinding bevat in het gewenste concentratiebereik gedurende nog eens 24 uur bij 37 °C, en geconditioneerde media worden verzameld. Voor de meting van totaal Aβ worden monsters geanalyseerd met dezelfde ELISA (266–3D6) als gebruikt voor de HEK 293-celassays. Analyses van monsters voor Aβ42-productie worden uitgevoerd door een afzonderlijke ELISA (21F12–3D6) die een vangst-antilichaam gebruikt dat specifiek is voor de Aβ42 C-terminus. Remming van de productie voor zowel totaal Aβ als Aβ42 wordt bepaald door het verschil tussen de waarden voor de compoundbehandeling en de basislijstperioden. Na het uitzetten van het percentage remming versus de concentratie van deze verbinding, worden de gegevens geanalyseerd met XLfit-software, zoals hierboven, om de potentie te bepalen.
Celassay:[2]
  • Cellijnen

    SK-MES-1

  • Concentraties

    2.5 μM to 160 μM

  • Incubatietijd

    72 hours

  • Methode

    Cells are seeded into 96-well plates and exposed to 0.1% DMSO or DAPT at concentrations in the range of 2.5 μM–160 μM for 72 hours. Cytotoxicity is determined with 3-(4, 5)-dimethylthiahiazo-(-z-y1)-3, 5-di-phenytetrazoliumromide (MTT) dye reduction assay with minor modifications. Briefly, after incubation with this compound, 20 μL MTT solution (5 mg/mL in PBS) is added to 180 μL medium in each well and plates are incubated for 4 hours at 37 °C, and subsequently 150 μL DMSO is added to each well, and mixed by shaking at room temperature for 15 minutes. Absorption is measured by an enzyme-linked immunosorbent assay at 490 nm to determine absorbance values. α-MEM supplemented with the same amount of MTT solution and solvent is used as blank solution. The IC50 value is calculated using PROBIT program in SPSS.
Dierstudie:[1]
  • Dierlijke modellen

    Heterozygous PDAPP transgenic mice overexpressing the APPV717F mutant form of the amyloid precursor protein.

  • Doseringen

    ≤100 mg/kg

  • Toediening

    Administered via p.o.

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11145990/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22583356/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/22445932/

Klantproductvalidatie

Western blotting showing increased unconjugated SUMO1 levels in Notch1 ΔE cells treated with 10 uM DAPT for 3 days. Tubulin was used as a loading control.

Gegevens van [ Oncogene , 2014 , 10.1038/onc.2014.319 ]

A panel of GICs was treated with the indicated doses of DAPT for 48 hours. γSecretase inhibitors inhibited expression of NICD, Hes1, Hes3, and Hes5 in a dose-dependent manner.

Gegevens van [ Stem Cells , 2014 , 32(1), 301-12 ]

R26PR;cre tumors express high levels of NICD and are sensitive to pharmacological inhibition of NOTCH1 signaling. (C) A cell line derived from R26PR;MMTV-cre tumor cells was cultured in the presence of a γ-secretase inhibitor, DAPT, or DMSO vehicle. Live cells were counted at 24, 48 and 72 hours of culture. (D) Western blot analysis of NICD following DAPT treatment.

Gegevens van [ Dis Model Mech , 2013 , 6(6), 1494-506 ]

<p>Human corneal epithelial cells were subjected to a scratch assay and then treated with DAPT or DMSO (control) (A). The effect of DAPT concentration on scratch assay wound closure rate was measured (P < 0.001) (B).  Western blot for Notch1IC confirmed that 10uM DAPT can effectively inhibit Notch activation (C). HCE-T cells pretreated with DAPT migrated 2.2 times faster than control in transwell migration assay (P < 0.0001) while Jagged1 treated cells migrated 20% slower but did not reach statistical significance (P =0.077) (D).</p>

Gegevens van [ Invest Ophth Vis Sci , 2012 , 53,12 ]

Sellecks DAPT Is geciteerd door 411 Publicaties

Alpha hemolysin enhances the immune response by modulating dendritic cell differentiation via ADAM10-Notch signaling [ Signal Transduct Target Ther, 2025, 10(1):334] PubMed: 41062455
Innate immune sensing of rotavirus by intestinal epithelial cells leads to diarrhea [ Cell Host Microbe, 2025, 33(3):408-419.e8] PubMed: 40037352
Geometrically-engineered human motor assembloids-on-a-chip for neuromuscular interaction readout and hypoxia-driven disease modeling [ Nat Commun, 2025, 16(1):8693] PubMed: 41028715
Dysregulation of FGFR1 signaling in the hippocampus facilitates depressive disorder [ Exp Mol Med, 2025, 57(8):1818-1836] PubMed: 40813470
Preclinical quality, safety, and efficacy of a CGMP iPSC-derived myogenic progenitor product for the treatment of muscular dystrophies [ Mol Ther, 2025, S1525-0016(25)00543-X] PubMed: 40682272
Targeting endothelial MYC using siRNA or miR-218 nanoparticles sensitizes chemo- and immuno-therapies by recapitulating the Notch activation-induced tumor vessel normalization [ Theranostics, 2025, 15(11):5381-5401] PubMed: 40303332
Spatiotemporal dynamics of early oogenesis in pigs [ Genome Biol, 2025, 26(1):2] PubMed: 39748324
α-synuclein fibrils per se but not α-synuclein seeded aggregation causes mitochondrial dysfunction and cell death in human neurons [ Redox Biol, 2025, 86:103817] PubMed: 40812158
Neutrophil extracellular traps-triggered hepatocellular senescence exacerbates lipotoxicity in non-alcoholic steatohepatitis [ J Adv Res, 2025, S2090-1232(25)00175-4] PubMed: 40068761
Requirements for the neurodevelopmental disorder-associated gene ZNF292 in human cortical interneuron development and function [ Cell Rep, 2025, 44(5):115597] PubMed: 40257863

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.