CW069

CatalogusnummerS7336 Batch:S733601

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C₂₃H₂₁IN₂O₃

Moleculair gewicht

500.33

CAS-nr.

1594094-64-0

Oplosbaarheid (25°C)*

In vitro

DMSO

100 mg/mL (199.86 mM)

Ethanol

4 mg/mL (7.99 mM)

Water

Insoluble

In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)

Homogeneous suspension	CMC-NA	≥5mg/ml	Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution	5%DMSO 1 40%PEG300 2 5%Tween80 3 50%ddH2O Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	5.000mg/ml (9.99mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 100 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results.
Clear solution	5% DMSO 1 95% Corn oil Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.	1.000mg/ml (2.00mM)	Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 20 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results.

* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving

CW069 is een allosterische en selectieve remmer van het microtubuli-motorproteïne HSET met een IC50 van 75 μM, met aanzienlijke selectiviteit ten opzichte van KSP.

Doelen

HSET

75 μM

In vitro

CW069 verhoogt multipolaire spoelen in N1E-115 cellen met surnumeraire centrosomen zonder de bipolaire spoel morfologie in normale menselijke dermale fibroblastcellen te veranderen. Deze verbinding remt de groei in kankercellen N1E-115 met een IC50 van 10 μM, maar niet in NHDF of primaire menselijke beenmergcellen.

Kenmerken

Allosterische, HSET-selectieve remmer.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:^{^[1]}	In vitro enzymatische ATPase-assay Het protocol is geoptimaliseerd voor gebruik met full-length, N-terminaal, 6His-tagged HSET en KSP, en meet de MT-gestimuleerde activiteit van de eiwitten. Remming van de Gsp-synthetase-activiteit van HSET/KSP wordt spectrofotometrisch waargenomen door de hydrolyse van ATP te koppelen aan de oxidatie van NADH via pyruvaatkinase/lactaatdehydrogenase-reacties. De assay wordt geïnitieerd door gezuiverd Gsp-synthetase/amidase (12,8 nM) toe te voegen aan een assaymengsel dat de volgende componenten (eindconcentratie) bevat: 6 nM eiwit, 0,07 mg/ml MT's (University Biologicals), 1,56 mM glutathion, 10 mM spermidine, 2 mM ATP, 2,7 mM MgCl₂, 1 mM fosfo(enol)-pyruvaat, 0,2 mM NADH, 50 μg/ml lactaatdehydrogenase, 100 μg/ml pyruvaatkinase en verschillende concentraties van deze verbinding, alles in 50 mM Na PIPES (pH 6,8) bij 37°C. De ADP-Glo detectie-assay (Promega) wordt uitgevoerd zoals beschreven in de instructies van de fabrikant. Alle toevoegingen van verbindingen werden uitgevoerd met behulp van een multidrop BioMek Nxp. Platen werden gelezen met behulp van een Pherastar microplaatlezer.
Celassay:^{^[1]}	Cellijnen N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells. Concentraties ~400 μM Incubatietijd 72 hours Methode Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Kinase-assay:^{^[1]}

In vitro enzymatische ATPase-assay
Het protocol is geoptimaliseerd voor gebruik met full-length, N-terminaal, 6His-tagged HSET en KSP, en meet de MT-gestimuleerde activiteit van de eiwitten. Remming van de Gsp-synthetase-activiteit van HSET/KSP wordt spectrofotometrisch waargenomen door de hydrolyse van ATP te koppelen aan de oxidatie van NADH via pyruvaatkinase/lactaatdehydrogenase-reacties. De assay wordt geïnitieerd door gezuiverd Gsp-synthetase/amidase (12,8 nM) toe te voegen aan een assaymengsel dat de volgende componenten (eindconcentratie) bevat: 6 nM eiwit, 0,07 mg/ml MT's (University Biologicals), 1,56 mM glutathion, 10 mM spermidine, 2 mM ATP, 2,7 mM MgCl₂, 1 mM fosfo(enol)-pyruvaat, 0,2 mM NADH, 50 μg/ml lactaatdehydrogenase, 100 μg/ml pyruvaatkinase en verschillende concentraties van deze verbinding, alles in 50 mM Na PIPES (pH 6,8) bij 37°C. De ADP-Glo detectie-assay (Promega) wordt uitgevoerd zoals beschreven in de instructies van de fabrikant. Alle toevoegingen van verbindingen werden uitgevoerd met behulp van een multidrop BioMek Nxp. Platen werden gelezen met behulp van een Pherastar microplaatlezer.

Celassay:^{^[1]}

Cellijnen
N1E-115 cells, NHDF and primary human bone marrow cells.
Concentraties
~400 μM
Incubatietijd
72 hours
Methode
Cells are cultured in DMEM supplemented with 10% fetal calf serum (FCS) at 37°C and 5% CO2. All compounds used in the Sulforhodamine B colorimetric (SRB) assay are dissolved in DMSO and diluted in culture medium to a final concentration of 0.2% DMSO. For the SRB assay and live-cell imaging, cells are seeded in 96-well plates at a density of 2,500 cells per well. After 24 hr, the cells are treated with this compound for 72 hr, with triplicate wells for each concentration. For the SRB assay, the cells are then fixed with trichloroacetic acid (TCA) and stained with SRB. Fluorescence is quantified using an Infinite 200 PRO plate-reader at a wavelength of 545 nm. Compound-treated wells are compared with solvent control wells and the concentration of this chemical that results in 50% of the solvent-control cell growth is designated as the IC50 concentration, calculated using Graphpad PRISM 6. At least three biological replicates are performed for each assay.

Referenties

https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24210220/

Klantproductvalidatie

: Gegevens van [ , , J Cell Sci, 2017, 130(21):3676-3684 ]

Sellecks CW069 Is geciteerd door 8 Publicaties

Two cancer cell lines utilize Myosin 10 and the kinesin HSET differentially to maintain mitotic spindle bipolarity [ PLoS One, 2025, 20(5):e0325016]	PubMed: 40440343
Molecular landscape and functional characterization of centrosome amplification in ovarian cancer [ Nat Commun, 2023, 14(1):6505]	PubMed: 37845213
KIF24 depletion induces clustering of supernumerary centrosomes in PDAC cells [ Life Sci Alliance, 2022, 5(11)e202201470]	PubMed: 35803737
Terminally differentiated osteoclasts organize centrosomes into large clusters for microtubule nucleation and bone resorption [ Mol Biol Cell, 2022, mbcE22030098]	PubMed: 35511803
IFT proteins interact with HSET to promote supernumerary centrosome clustering in mitosis. [ EMBO Rep, 2020, 9:e49234]	PubMed: 32270908
Unraveling mitotic protein networks by 3D multiplexed epitope drug screening [ Mol Syst Biol, 2018, 14(8):e8238]	PubMed: 30104419
Centrosome Clustering Is a Tumor-selective Target for the Improvement of Radiotherapy in Breast Cancer Cells [Choe MH Anticancer Res, 2018, 38(6):3393-3400]	PubMed: 29848688
Precocious Centriole Disengagement and Centrosome Fragmentation Induced by Mitotic Delay [ Nat Commun, 2017, 13;8:15803]	PubMed: 28607478

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.