CP-91149

CP-91149 vertoont een 200-voudig hogere remmende activiteit tegen humane lever glycogeenfosforylase a (HLGPa) dan cafeïne (IC50 = 26 μM). Deze verbinding (10-100 μM) remt -gestimuleerde glycogenolyse in geïsoleerde rattenhepatocyten op een dosisafhankelijke manier, en in primaire humane hepatocyten met een IC50 van ~2,1 μM. [1] Het remt ook potent de activiteiten van humane spierfosforylase a en b met IC50 van respectievelijk 0,2 μM en ~0,3 μM. Behandeling met deze chemische stof bij 2,5 μM induceert inactivatie van phosphorylase en sequentiële activering van glycogeen synthase in hepatocyten, en verhoogt de glycogeensynthese 7-voudig bij 5 mM glucose en 2-voudig bij 20 mM glucose. Het kan de effecten van phosphorylase-overexpressie gedeeltelijk tegengaan. [2] Deze verbinding remt ook potent hersen-GP met IC50 van 0,5 μM in A549-cellen. Behandeling bij 10-30 μM veroorzaakt een significante glycogeenaccumulatie in A549- en HSF55-cellen. De behandeling verhoogt G1-fasecellen met een significante vermindering van de S-fasepopulatie in HSF55-cellen, gecorreleerd met verhoogde expressie van p21 en p27. [3] Deze chemische stof bevordert ook de defosforylering en activering van GS (glycogeen synthase) in niet-gemodificeerde of GP-overexpresserende gekweekte humane spiercellen, maar uitsluitend in glucose-deprived cellen. [4]

Orale toediening van CP-91149 aan diabetische ob/ob-muizen bij 25-50 mg/kg veroorzaakt een snelle (3 uur) glucoseverlaging met 100-120 mg/dl zonder hypoglykemie te veroorzaken, als gevolg van de remming van glycogenolyse in vivo. Deze behandeling met het middel verlaagt de glucosespiegels niet bij normoglycemische, niet-diabetische muizen. [1] Bij niet-nuchtere Goto-Kakizaki (GK)-ratten onderdrukt toediening van deze chemische stof in combinatie met CS-917 de hepatische glycogeenreductie door CS-917 en verlaagt het plasma glucose meer dan enkelvoudige toediening van CS-917. [5]

• Phosphorylase enzymtest

  De activiteit van humane lever glycogeenfosforylase a (HLGPa, 85 ng) wordt gemeten in de richting van glycogeensynthese door de afgifte van fosfaat uit glucose-1-fosfaat bij 22°C in 100 μL buffer die 50 mM Hepes (pH 7,2), 100 mM KCl, 2,5 mM EGTA, 2,5 mM MgCl₂, 0,5 mM glucose-1-fosfaat en 1 mg/mL glycogeen bevat. Fosfaat wordt gemeten bij 620 nm, 20 minuten na toevoeging van 150 μL 1 M HCl dat 10 mg/mL ammoniummolybdaat en 0,38 mg/mL malachietgroen bevat. Toenemende concentraties van deze verbinding worden aan de assay toegevoegd in 5 μL 14% DMSO.

• Cellijnen

  HSF55 and T98G

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~50 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of CP-91149 for 72hours. Viability is determined with manual cell counts following staining with trypan blue exclusion assay. Cells are fixed with 70% ethanol. DNA is stained with propidium iodide and the intensity of fluorescence is measured using a Becton-Dickinson flow cytometer at 488nm for excitation and at 650nm for emission. The cell cycle profile is analyzed using Modifit's Sync Wizard.

• Dierlijke modellen

  Obese, diabetic male C57BL/6J-Lep^(ob/ob) mice and their lean, nondiabetic C57BL/6J-/+ littermates

• Doseringen

  ~50 mg/kg

• Toediening

  Orally