Delanzomib

CEP-18770 vertoont een marginale preventie van de trypsine- en peptidyl-glutamylactiviteiten van het Proteasome.[1] CEP-18770 remt A2780 eierstokkankercellen, PC3 prostaatkanker, H460, LoVo darmkanker, RPMI8226 multipel myeloomkanker en HS-Sultan anaplastisch non-Hodgkin-lymfoom met IC50-waarden van respectievelijk 13,7, 22,2, 34,2, 11,3, 5,6 en 8,2 nM.[1] CEP-18770 blokkeert de ubiquitine-Proteasome-route in verschillende MM en in de chronische myeloïde leukemiecellijn K562. CEP-18770 veroorzaakt een accumulatie van ubiquitineerde eiwitten gedurende 4 tot 8 uur.[1] IκBα-degradatie wordt volledig geblokkeerd door voorbehandeling met CEP-18770. CEP-18770 remt significant hoge niveaus van NF-κB-activiteit in zowel RPMI-8226- als U266-cellen. De tijd- en concentratieafhankelijke onderdrukking van NF-kB DNA-bindingsactiviteit in MM-cellijnen door CEP-18770 leidt tot een afname van de expressie van verschillende NF-κB-gemoduleerde genen die de groei en overleving van tumorcellen mediëren, waaronder IkBα zelf, het X-chromosoom-gebonden remmer-van-apoptose-eiwit (XIAP), de pro-inflammatoire cytokines TNF-α en interleukine-1β (IL-1β), het intracellulaire adhesiemolecuul (ICAM1) en de pro-angiogene factor vasculaire endotheliale groeifactor.[1] De expressie van deze NF-κB-gemedieerde genen wordt geassocieerd met een gunstiger klinische respons op dit middel, wat hun potentiële prognostische waarde benadrukt als reactie op blootstelling aan CEP-18770.[1] De proapoptotische activiteit van CEP-18770 tegen MM is niet beperkt tot tumor-afgeleide MM-cellijnen, maar strekt zich uit tot primaire MM-explantaten van terugkerende of refractaire patiënten.[1] Bovendien produceert CEP-18770 in combinatie synergistische remming van de levensvatbaarheid van MM-cellen in vitro.[2]

CEP-18770 onthult een aanhoudende dosisgerelateerde relatieve tumorwichtremming. CEP-18770 leidt tot dosisgerelateerde complete tumorregressies, wat resulteert in een 50% incidentie van CR bij de maximaal getolereerde dosis (MTD) van 1,2 mg/kg intraveneus.[1] CEP-18770 onthult een dosisgerelateerde toename van de incidentie van tumorvrije muizen aan het einde van deze studies (120 dagen na tumor transplantatie). Orale toediening van CEP-18770 produceert een duidelijke afname van het tumorwicht en een opmerkelijke dosisgerelateerde incidentie van complete tumorregressie met minimale veranderingen in het lichaamsgewicht van de dieren gedurende de 120-daagse studies.[1]_Equiactieve doses van CEP-18770 onthullen een grotere en meer aanhoudende dosisgerelateerde remming van de tumor Proteasome-activiteit, die tijdelijk overeenkomt met maximale inductie van caspase-3- en 7-activiteit.[1] Het maximale apoptotische signaal is 2,5 keer groter voor CEP-18770. Daarentegen zijn de Proteasome-remmingsprofielen van CEP-18870 vergelijkbaar in de onderzochte normale perifere muizenweefsels (lever, longen, volbloed en hersenen [geen activiteit]) in zowel hun omvang als hun duur.[1] Geen Proteasome-remming wordt gedetecteerd in hersenweefsel op enig tijdspunt voor CEP-18770 of.[1] Enkelvoudig middel CEP-18770 PO vertoont ook duidelijke anti-MM-effecten in deze xenograft-modellen.[1]

• Onderzoek Proteasome-activiteit in celextracten

  Menselijke multipel myeloomcellen worden tweemaal gewassen met koude fosfaatgebufferde zoutoplossing, gepelleteerd en gelyseerd met één volume glasparels (<106 micron, zuurgewassen) en een gelijk volume homogenisatiebuffer (50 mM Tris (pH 7,4), 1 mM dithiothreitol, 5 mM MgCl₂, 2 mM ATP en 250 mM sucrose) door gedurende 15-30 min bij 4 °C op hoge snelheid te vortexen. Parels, membraanfracties, kernen en celresten worden vervolgens uit de supernatant verwijderd door centrifugatie bij 16.000 g gedurende 5 min. Het eiwitgehalte van de extracten wordt gekwantificeerd met behulp van de Bradford-assay. Proteasome-activiteit wordt zoals hieronder beschreven getest. Gelijke hoeveelheden (doorgaans 60 g) eiwit worden gedenatureerd door koken in reducerende monsterbuffer, gescheiden door 12,5% SDS-PAGE en elektrotransfer op polyvinylideenfluoride (PVDF) membranen. Immunoblotting wordt uitgevoerd met behulp van een dansyl-sulfonamidohexanoyl polyklonaal antilichaam (1:7.500, konijn) en mierikswortelperoxidase-gekoppeld geiten- of varkens-anti-konijn secundair antilichaam, gevolgd door verbeterde chemiluminescentie.

• Cellijnen

  HMEC and TEC cells

• Concentraties

  0-100 nM

• Incubatietijd

  6 hours

• Methode

  HMEC and TEC cells are seeded into 24-well plates at a density of 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed, air dried, and stained with crystal violet as described. Cell number is determined, in duplicate samples, on the basis of a standard curve obtained with known cell numbers. All experiments are performed in triplicate. In vitro formation of capillary-like structures is studied on cells (4 × 10⁴ cells/well in DMEM supplemented with 5% FCS. After incubation with proteasome inhibitors (48 hours), cells are washed (cells/well in 24-well plates) and seeded onto Matrigel-coated wells in DMEM containing 0.25% BSA. HMEC and TEC cells (5 × 10³ per well), suspended in 200 μL DMEM with 5% FCS (positive control), serum-free medium (negative control), are layered onto the Matrigel surface in the presence or absence of proteasome inhibitor CEP-18770. Cells are observed with a microscope and experimental results are then recorded after a 6-hour incubation at 37 °C. Data is analyzed, as the mean (× 1 SD) of total length of capillary-like structures, by the Micro-Image system and is expressed as mm/field by the computer analysis system in 5 different fields at 100 × magnification in duplicated wells for 4 different experiments.

• Dierlijke modellen

  Human MM RPMI 8226 subcutaneous xenograft model in SCID mice

• Doseringen

  From 1.5 to 4 mg/kg, twice for 7 days to 4 weeks.

• Toediening

  Intravenously