Bleomycin sulfate

UT-SCC-12A en UT-SCC-12B zijn beide resistenter tegen Bleomycin sulfate met IC50 van respectievelijk 14,2 nM en 13 nM. [1] Alveolaire macrofagen die gedurende 18 uur met 0,01 μg/mL tot 1 μg/mL van deze verbinding werden geïncubeerd, scheiden significant meer fibroblastgroeifactor af dan macrofagen die zonder deze chemische stof werden geïncubeerd. Macrofagen gestimuleerd met deze verbinding blijven significante hoeveelheden fibroblastgroeifactor produceren, zelfs nadat deze chemische stof is verwijderd en vervangen door vers (Bleomycin sulfate-vrij) medium. Fibroblastgroeifactorsecretie door met deze verbinding gestimuleerde alveolaire macrofagen wordt geremd door cycloheximide en de 5-lipoxygenase-remmers NDGA (nordihydroguaiaretinezuur) en BW755c, wat niet alleen een vereiste voor eiwitsynthese aangeeft, maar ook voor metabolieten van de 5-lipoxygenase-route van arachidonzuurmetabolisme voor de volledige expressie van activiteit. [2] Deze chemische stof (400 µg/mL) incubatie gedurende 24 uur vermindert de levensvatbaarheid van NTera-2-cellen en verhoogt de activiteiten van caspase-3, -8 en -9, Bax en cytoplasmatische cytochroom c-niveaus en verlaagt de Bcl-2-niveaus. [3] Wat onstabiele afwijkingen betreft, houdt het clastogene effect van deze verbinding op ADIPO-P2-cellen ten minste 10 dagen na blootstelling aan. Deze chemisch geïnduceerde telomeerinstabiliteit in zoogdiercellen houdt gedurende verschillende generaties na blootstelling aan. Bovendien suggereert het verschijnen van telomeerfusies in met deze verbinding blootgestelde cellen 10 dagen na behandeling dat deze chemische stof vertraagde telomeerinstabiliteit kan induceren. [4]

Dag 7 na Bleomycin sulfate, zijn CD45+ cellen in BALf bij NOX-/- 1,7 keer > WT, waarvan 57% Mf zijn die met 67% in WT en 83% in NOX-/- afnemen tegen dag 21. [5]

• Cellijnen

  ADIPO-P2 cells

• Concentraties

  2.5 μg/mL

• Incubatietijd

  30 minutes

• Methode

  ADIPO-P2 cells are grown in D-MEM high glucose medium supplemented with 20% fetal calf serum, penicillin (100 U/mL) and streptomycin (100 μg/mL) at 37 °C and 5% CO₂ atmosphere. Cells are cultured as monolayer in TC25 Corning flasks containing 1.5 × 10⁵ cells/mL. For each experiment, two flasks are set up, one for the control and one for the treated culture. During the log phase of growth ADIPO-P2 cells are treated with a 30 minutes pulse of 2.5 μg/mL of Bleomycin sulfate. Control cultures are set up in parallel but not exposed to this compound. Time of exposure and concentration of this chemical are chosen according to previous studies carried out in our laboratory with mammalian cells exposed to it. At the end of the pulse treatment with this compound, the cells are washed twice with Hank's balanced salt solution and kept in culture with fresh culture medium until harvesting. Cells are continuously maintained in culture during 5 passages or subcultures after treatment. Subcultivation is carried out whenever the cultures became confluent (approximately 4 × 10⁵ cells/mL of culture medium). To estimate cell growth, at the time of subcultivation cells are collected by trypsinization, an aliquot of about 200 μL stained with 0.4% trypan blue, and the number of viable cells is determined. Cells are then suspended in fresh culture medium and dispensed into new culture flasks containing 1 × 10⁵ cells/mL to continue growing. The rest of the cells is discarded or dispensed in another flask for cytogenetic analysis, which is performed at 18 hours and 10 days after the end of treatments. To analyze chromosomal aberrations, colchicine (0.1 μg/mL) is added to cell cultures during the last 3 hours of culture. Chromosome preparations are made following standard procedures. After harvesting, cells are hypotonically shocked, fixed in methanol:acetic acid (3:1), spread onto glass slides and processed for PNA-FISH. Two independent experiments are carried out.

• Dierlijke modellen

  CD-1 mice

• Doseringen

  5 mg/kg, 2 ml/kg

• Toediening

  Administered via i.t.