AZD4547 (Fexagratinib)

Vergeleken met FGFR1-3 vertoont AZD4547 een zwakkere activiteit tegen FGFR4 met een IC50 van 165 nM. AZD4547 remt alleen de recombinante VEGFR2 (KDR) kinase-activiteit met een IC50 van 24 nM, in de in vitro selectiviteitstest tegen een divers panel van representatieve menselijke kinases. AZD4547 bij 0,1 μM vertoont geen activiteit tegen een reeks recombinante kinases, waaronder ALK, CHK1, EGFR, MAPK1, MEK1, p70S6K, PDGFR, PKB, Src, Tie2 en PI3-kinase. Consistent wordt de potente selectiviteit van AZD4547 voor FGFR1-3 boven FGFR4, IGFR en KDR ook waargenomen in cellulaire fosforylatie-assays. AZD4547 heeft potente in vitro antiproliferatieve activiteit alleen tegen tumorcellijnen die gedereguleerde FGFR's tot expressie brengen, zoals KG1a, Sum52-PE en KMS11 met een IC50 van 18-281 nM, en is inactief tegen MCF7 en meer dan 100 additionele tumorcellijnen. AZD4547-behandeling remt potent de FGFR- en MAPK-fosforylatie in menselijke tumorcellijnen op een dosisafhankelijke manier. AZD4547 remt ook potent de fosforylatie van FRS2 en PLCγ, stroomafwaartse markers van FGFR-signalering. Met name beïnvloedt AZD4547 de AKT-fosforylatie in de borstcellijnen, MCF7 en Sum52-PE, maar niet in de KG1a- en KMS11-lijnen. AZD4547-behandeling induceert significant apoptose in Sum52-PE- en KMS11-cellen, verhoogt dramatisch de G1-arrest maar geen apoptose in KG1a-cellen, en heeft geen effect op de celcyclusdistributie of apoptose in MCF7-cellen. [1]

Orale toediening van AZD4547 met 3 mg/kg tweemaal daags bij muizen met KMS11-tumoren resulteert in een significante tumorremming van 53% vergeleken met voertuigbehandelde controles, en AZD4547 met 12,5 mg/kg eenmaal daags of 6,25 mg/kg tweemaal daags leidt tot volledige tumorstasis, wat gepaard gaat met dosisproportionele farmacodynamische modulatie van phospho-FGFR3 en verminderde KMS11-tumorcelproliferatie. Bovendien resulteert orale toediening van AZD4547 met 12,5 mg/kg eenmaal daags in 65% tumorremming in het FGFR1-fusie KG1a-xenograftmodel. Bij effectieve dosisniveaus vertoont AZD4547 geen anti-angiogenese effecten. AZD4547 heeft geen significant effect op de bloeddruk en mist daarom in vivo anti-KDR-activiteit. Consistent is dat een dosering van 6,25 mg/kg oraal tweemaal daags AZD4547 inactief is in de cediranib-gevoelige xenograftmodellen, waaronder Calu-6, HCT-15 en LoVo. [1]

• AZD4547 kinase-activiteit

  De capaciteit van AZD4547 om de menselijke recombinante kinase-activiteiten van FGFR1-3 te remmen, wordt getest met ATP-concentraties op of net onder de respectieve K_m.

• Cellijnen

  KG1a, Sum52-PE, KMS11, and MCF7

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of AZD4547 for 72 hours. The antiproliferative IC50 values are obtained by MTS proliferation assay. For fluorescence-activated cell sorting (FACS), cells are fixed with 70% ethanol and then incubated with propidium iodide/RNase A labeling solution. Cell cycle profiles are assessed with a FACSCalibur instrument and CellQuest analysis software. For apoptotic analysis, cells and media are gently harvested and centrifuged, followed by washing of cell pellets. Cells are then processed for Annexin V isothiocyanate (FITC) staining and propidium iodide uptake. The proportion of cells staining positive for Annexin V are then assessed with a FACSCalibur instrument and quadrant sorting is done by CellQuest analysis software.

• Dierlijke modellen

  Female swiss derived nude (nu/nu) and severe combined immunodeficient mice (SCID) injected s.c. with LoVo, HCT-15, Calu-6, KMS11 or KG1a

• Doseringen

  1.5-50 mg/kg

• Toediening

  Oral gavage once daily or twice daily