AT7519 HCl

CatalogusnummerS7808 Batch:S780801

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C16H18Cl3N5O2
Moleculair gewicht 418.71 CAS-nr. 902135-91-5
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 52 mg/mL (124.19 mM)
Water 43 mg/mL (102.69 mM)
Ethanol 28 mg/mL (66.87 mM)
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
Saline

Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.

 30.000mg/ml (71.65mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 30 mg of this product to 1 ml of physiological saline (0.9% NaCL solution), mix evenly to make it clear, The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving AT7519 HCl is een multi-CDK-remmer voor CDK1, 2, 4, 6 en 9 met een IC50 van 10-210 nM in celvrije assays. Het is minder potent voor CDK3 en weinig actief voor CDK7. Fase 2.
Doelen
CDK9/CyclinT
(Cell-free assay)		 CDK5/p35
(Cell-free assay)		 CDK2/CyclinA
(Cell-free assay)		 GSK-3β
(Cell-free assay)		 CDK4/CyclinD1
(Cell-free assay)		 Meer bekijken
<10 nM 13 nM 47 nM 89 nM 100 nM
In vitro AT7519 is een ATP-competitieve CDK-remmer met een Ki-waarde van 38 nM voor CDK1. AT7519 is inactief tegen alle niet-CDK-kinasen met uitzondering van GSK3β (IC50 = 89 nM). AT7519 vertoont een potente antiproliferatieve activiteit in een verscheidenheid aan menselijke tumorcellijnen met IC50-waarden variërend van 40 nM voor MCF-7 tot 940 nM voor SW620, consistent met de remming van CDK1 en CDK2. AT7519 induceert dosisafhankelijke cytotoxiciteit in myeloom (MM) cellijnen met IC50-waarden variërend van 0,5 tot 2 μM na 48 uur, waarbij de meest gevoelige cellijnen MM.1S (0,5 μM) en U266 (0,5 μM) zijn en de meest resistente MM.1R (>2 μM). Het induceert geen cytotoxiciteit in perifere bloedmononucleaire cellen (PBMNC). AT7519 overwint gedeeltelijk het proliferatieve voordeel dat wordt verleend door IL6 en IGF-1, evenals het beschermende effect van beenmergstamcellen (BMSC's). AT7519 induceert snelle defosforylering van RNA pol II CTD op serine 2- en serine 5-plaatsen en leidt tot de remming van transcriptie, gedeeltelijk bijdragend aan de AT7519-geïnduceerde cytotoxiciteit van MM-cellen. AT7519 induceert activering van GSK-3β door GSK-3β-fosforylering te downreguleren, wat ook bijdraagt aan de AT7519-geïnduceerde apoptose onafhankelijk van de remming van transcriptie.
In vivo Een tweemaal daagse dosering van AT7519 (9,1 mg/kg) veroorzaakt tumorregressie van zowel vroeg- als laatstadium s.c. tumoren in de HCT116 en HT29 colonkanker xenograftmodellen. AT7519-behandeling (15 mg/kg) remt de tumorgroei en verlengt de mediane algehele overleving van muizen in het humane MM xenograftmuismodel in samenhang met verhoogde caspase 3-activering.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[1]
  • In vitro Kinase Assays

    Kinase-assays voor CDK1, CDK2 en GSK3-β worden allemaal uitgevoerd in een radiometrisch filterbindingformaat. Assays voor CDK5 zijn in DELFIA-formaat en voor CDK's 4 en 6 in ELISA-formaat. Voor CDK's 1 en 2 worden de relevante CDK en 0,12 μg/mL Histone H1 geïncubeerd in 20 mM MOPS, pH 7,2, 25 mM β-glycerofosfaat, 5 mM EDTA, 15 mM MgCl2, 1 mM natriumorthovanadaat, 1 mM DTT, 0,1 mg/mL BSA, 45 μM ATP (0,78 Ci/mmol) en verschillende concentraties van AT7519 gedurende respectievelijk 2 of 4 uur. Voor GSK3-β worden het relevante enzym en 5 μM glycogeen synthase peptide 2 samen met 10 mM MOPS pH 7,0, 0,1 mg/mL BSA, 0,001% Brij-35, 0,5% glycerol, 0,2 mM EDTA, 10 mM MgCl2, 0,01% β-mercapto-ethanol, 15 μM ATP (2,31 Ci/mmol) en verschillende concentraties van AT7519 gedurende 3 uur geïncubeerd. Assay-reacties worden gestopt door een overmaat orthofosforzuur toe te voegen en gefilterd met Millipore MAPH-filterplaten. De platen worden vervolgens gewassen, scintillant toegevoegd en radioactiviteit gemeten door scintillatietelling op een Packard TopCount. Voor CDK5 worden CDK5/p35 en 1 μM van een gebiotinyleerd Histone H1-peptide (Biotin-PKTPKKAKKL) geïncubeerd in 25 mM Tris-HCl, pH 7,5, 2,5 mM MgCl2, 0,025% Brij-35, 0,1 mg/mL BSA, 1 mM DTT, 15 μM ATP en verschillende concentraties van AT7519 gedurende 30 minuten. Assay-reacties worden gestopt met EDTA, overgebracht naar Neutravidine-gecoate platen en gefosforyleerd peptide wordt gekwantificeerd met behulp van een konijn phospho-cdk1-substraat polyclonaal antilichaam en DELFIA europium-gelabeld anti-konijn IgG secundair antilichaam met behulp van tijdopgeloste fluorescentie bij λex=335nm, λem=620nm. Voor CDK 4 en 6 assays worden platen gecoat met GST-pRb769-921 en geblokkeerd met Superblock. CDK4 of 6 wordt geïncubeerd met 15 mM MgCl2, 50 mM HEPES, pH 7,4, 1 mM DTT, 1 mM EGTA, pH 8,0, 0,02% Triton X-100, 2,5% DMSO en verschillende concentraties van AT7519; de reactie wordt geïnitieerd door toevoeging van ATP. Na 30 minuten worden reacties gestopt door toevoeging van 0,5 M EDTA pH 8,0. Platen worden vervolgens gewassen en gedurende één uur geïncubeerd met het primaire antilichaam (anti-p-Rb Serine 780) verdund in Superblock, gevolgd door secundair antilichaam (alkalische fosfatase gekoppeld anti-konijn) gedurende nog een uur. Platen worden ontwikkeld met behulp van het Attophos-systeem en fluorescentie wordt afgelezen op een Spectramax Gemini plaatlezer bij excitatie 450 nm en emissie 580 nm. In alle gevallen worden IC50-waarden berekend uit replica-curven, met behulp van GraphPad Prism-software.
Celassay:[2]
  • Cellijnen

    MM.1S, MM.1R, RPMI8226, U266, RPMI8266, RPMI-Dox40, OPM1 cells, primary MM cells and PBMNCs

  • Concentraties

    Dissolved in DMSO at a concentration of 10 mM, final concentrations 0.25-4 μM

  • Incubatietijd

    24 or 48 hours

  • Methode

    Cells are incubated with different concentrations of AT7519 for 24 or 48 hours at 37°C. Cell viability is assessed by measuring 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5 diphenyl tetrasodium bromide (MTT) dye absorbance. DNA synthesis is measured by tritiated thymidine uptake (3H-TdR). Apoptosis is assessed by using Annexin V/PI staining. The percentage of cells undergoing apoptosis is defined as the sum of early apoptosis (Annexin V-positive cells) and late apoptosis (Annexin V-positive and PI-positive cells
Dierstudie:[2]
  • Dierlijke modellen

    Male SCID mice inoculated subcutaneously with MM.1S cells

  • Doseringen

    15 mg/kg/day

  • Toediening

    Dosed i.p.

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/19174555/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20101221/

Klantproductvalidatie

(c) Effect of AT7519 treatment on RNA pol II occupancy at the PRCC gene. MM1.S cells were treated with either DMSO vehicle (blue) or 2 μM AT7519 (brown) for 6 h, followed by RNA pol II ChIP-seq analysis. Twenty-fold magnifications of the rpm/bp scale of these gene tracks are shown in the right panel to show the difference in reads for elongating RNA pol II. TR, RNA pol II traveling ratio.(d) Genome-wide binding average RNA pol II (ChIP-seq) on active promoters and gene bodies following treatment of MM1.S cells with DMSO vehicle (blue) or 2 μM of AT7519 (brown) for 6 h. Magnification of the rpm/bp scale at gene bodies is shown in the inset. The inset includes RNA polymerase II traveling ratio distributions (TR, mean) derived from MM1.S cells treated with DMSO (blue) or 2 μM AT7519 (red).(e) Chemical structures of the pan-CDK inhibitor AT7519 and its biotinylated counterpart bio-AT7519.(f) In vitro kinase assays with recombinant cyclin T-CDK9 complex in the presence of increasing concentrations of AT7519 or bio-AT7519. The derived IC50 values for each compound are shown.(g) Effect of AT7519 and bio-AT7519 on MM1.S cell proliferation. Cells were treated with varying concentrations of drug for 72 h as indicated. The derived EC50 values for each compound are shown.

Gegevens van [ , , Nat Biotechnol, 2014, 32(1): 92-96. ]

(C) Western blot analyses following treatment with the indicated doses of cyclin-dependent kinase (CDK) inhibitors for apoptosis markers, poly(ADP-ribose) polymerase 1 (PARP-1), caspase 3, cleaved form of caspase 3 and β-actin.

Gegevens van [ , , Int J Oncol, 2018, 53(2):703-712 ]

Sellecks AT7519 HCl Is geciteerd door 12 Publicaties

Interleukin-15 enhanced the survival of human γδT cells by regulating the expression of Mcl-1 in neuroblastoma [ Cell Death Discov, 2022, 8(1):139] PubMed: 35351861
O-GlcNAc transferase maintains metabolic homeostasis in response to CDK9 inhibition [ Glycobiology, 2022, cwac038] PubMed: 35708495
Cdk2 suppresses IL-23 expression and the onset of severe acute pancreatitis [ Immun Inflamm Dis, 2022, 10(6):e631] PubMed: 35634959
High-content image-based analysis and proteomic profiling identifies Tau phosphorylation inhibitors in a human iPSC-derived glutamatergic neuronal model of tauopathy [ Sci Rep, 2021, 11(1):17029] PubMed: 34426604
The cyclin-dependent kinase inhibitor AT7519 augments cisplatin's efficacy in ovarian cancer via multiple oncogenic signaling pathways [ Fundam Clin Pharmacol, 2021, 10.1111/fcp.12709] PubMed: 34212421
Development of a miRNA-controlled dual-sensing system and its application for targeting miR-21 signaling in tumorigenesis [ Exp Mol Med, 2020, 10.1038/s12276-020-00537-z] PubMed: 33311703
Inhibition of Cyclin-dependent Kinase (CDK) Decreased Survival of NB4 Leukemic Cells: Proposing a p53-Independent Sensitivity of Leukemic Cells to Multi-CDKs Inhibitor AT7519 [ Iran J Pharm Res, 2020, 19(3):144-155] PubMed: 33680018
Fibroblast growth factor receptor influences primary cilium length through an interaction with intestinal cell kinase [ Proc Natl Acad Sci U S A, 2019, 116(10):4316-4325] PubMed: 30782830
CDK Blockade Using AT7519 Suppresses Acute Myeloid Leukemia Cell Survival through the Inhibition of Autophagy and Intensifies the Anti-leukemic Effect of Arsenic Trioxide [ Iran J Pharm Res, 2019, 18(Suppl1):119-131] PubMed: 32802093
Frequent Genetic Aberrations in the CDK4 Pathway in Acral Melanoma Indicate the Potential for CDK4/6 Inhibitors in Targeted Therapy [Kong Y Clin Cancer Res, 2018, 23(22):6946-6957] PubMed: 28830923

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.