In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml
Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar. * Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties. * Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)
Voorbereiden van stamoplossingen
Biologische activiteit
Beschrijving
AMG319 is een krachtige en selectieve PI3Kδ-remmer met een IC50 van 18 nM, >47-voudige selectiviteit ten opzichte van andere PI3Ks. Fase 2.
Doelen
PI3Kδ
PI3Kγ
18 nM
850 nM
In vitro
AMG319 remt anti-IgM/CD40L-geïnduceerde B-celproliferatie met een IC50 van 8,6 nM en verlaagt het pAkt-niveau met een IC50 van 1,5 nM. Deze verbinding remt ook anti-IgD-geïnduceerde CD-69-expressie in HWB.
In vivo
Bij vrouwelijke Lewis-ratten remt AMG319 (3 mg/kg, p.o.) de KLH-geïnduceerde ontstekingsreactie met 88%. Bij transgene (IgMm) muizen remt deze verbinding (, p.o.) in vivo pAKT met een IC50 van 1,9 nM.
Een PI3K Alphascreen-assay wordt gebruikt om de activiteit te meten van een panel van vier fosfo-inositide 3-kinases: PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ en PI3Kδ. Enzymreactiebuffer wordt bereid met steriel water en 50 mM Tris-HCl, pH 7, 14 mM MgCl2, 2 mM natriumcholaat en 100 mM NaCl. 2 mM DTT wordt vers toegevoegd op de dag van het experiment. De Alphascreen-buffer wordt gemaakt met steriel water en 10 mM Tris-HCl, pH 7,5, 150 mM NaCl, 0,10% Tween 20 en 30 mM EDTA. Vervolgens wordt 1 mM DTT vers toegevoegd op de dag van het experiment. Compoundbronplaten die voor deze assay worden gebruikt, zijn 384-wells Greiner heldere polypropyleenplaten die testverbindingen bevatten bij 5 mM en 1:2 verdund over 22 concentraties. Kolommen 23 en 24 bevatten alleen DMSO, aangezien deze putjes respectievelijk de positieve en negatieve controles omvatten. Bronplaten worden gerepliceerd door 0,5 μL per putje over te brengen naar 384-wells Optiplates. Elke PI3K-isoform wordt verdund in enzymreactiebuffer tot 2× werkvoorraden. PI3Kα wordt verdund tot 1,6 nM, PI3Kβ wordt verdund tot 0,8 nM, PI3Kγ wordt verdund tot 15 nM en PI3Kδ wordt verdund tot 1,6 nM. PI(4,5)P2 wordt verdund tot 10 μM en ATP werd verdund tot 20 μM. Deze 2× voorraad wordt gebruikt in de assays voor PI3Kα en PI3Kβ. Voor de assay van PI3Kγ en PI3Kδ wordt PI(4,5)P2 verdund tot 10 μM en ATP werd verdund tot 8 μM om een vergelijkbare 2× werkvoorraad te bereiden. Alphascreen-reactieoplossingen worden gemaakt met behulp van beads uit de anti-GST Alphascreen-kit. Twee 4× werkvoorraden van de Alphascreen-reagentia worden gemaakt in Alphascreen-reactiebuffer. In één voorraad wordt gebiotinyleerd-IP4 verdund tot 40 nM en streptavadin-donor-beads worden verdund tot 80 μg/mL. In de tweede voorraad wordt PIP3-bindend eiwit verdund tot 40 nM en anti-GST-acceptor-beads werden verdund tot 80 μg/mL. Als negatieve controle wordt een referentieremmer in een concentratie ≫Ki (40 μM) opgenomen in kolom 24 als negatieve (100% remming) controle. Met behulp van een 384-wells Multidrop wordt 10 μL/putje van 2× enzymvoorraad toegevoegd aan kolommen 1–24 van de assayplaten voor elke isoform. Een hoeveelheid van 10 μL/putje van de juiste substraat 2× voorraad (die 20 μM ATP bevat voor de PI3Kα- en -β-assays en 8 μM ATP bevat voor de PI3Kγ- en -δ-assays) wordt vervolgens toegevoegd aan kolommen 1–24 van alle platen. Platen worden vervolgens 20 min bij kamertemperatuur geïncubeerd. In het donker wordt 10 μL/putje van de donor-bead-oplossing toegevoegd aan kolommen 1–24 van de platen om de enzymreactie te doven. De platen worden 30 min bij kamertemperatuur geïncubeerd. Nog steeds in het donker wordt 10 μL/putje van de acceptor-bead-oplossing toegevoegd aan kolommen 1–24 van de platen. De platen worden vervolgens 1,5 uur in het donker geïncubeerd. De platen worden afgelezen op een Envision multimode plaatlezer met een 680 nm excitatie filter en een 520–620 nm emissiefilter.
Impaired airway epithelial barrier integrity was mediated by PI3Kδ in a mouse model of lipopolysaccharide-induced acute lung injury
[ Int Immunopharmacol, 2021, 95:107570]
Topical Application of the PI3Kβ-Selective Small Molecule Inhibitor TGX-221 Is an Effective Treatment Option for Experimental Epidermolysis Bullosa Acquisita
[ Front Med (Lausanne), 2021, 8:713312]
In vivo microscopy reveals macrophage polarization locally promotes coherent microtubule dynamics in migrating cancer cells
[ Nat Commun, 2020, 11(1):3521]
RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.
VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.
NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.
