Alvespimycin (17-DMAG) Hydrochloride

17-DMAG vertoont een ongeveer 2 keer hogere potentie tegen menselijke Hsp90 dan 17-AAG, met een IC50 van 62 nM versus 119 nM. In SKBR3- en SKOV3-cellen die Hsp90-cliëntproteïne Her2 overexpressie vertonen, veroorzaakt 17-DMAG een downregulatie van Her2 met EC50 van respectievelijk 8 nM en 46 nM, evenals inductie van Hsp70 met EC50 van respectievelijk 4 nM en 14 nM, leidend tot significante cytotoxiciteit met GI50 van respectievelijk 29 nM en 32 nM, consistent met Hsp90-remming. [1] 17-DMAG in combinatie met vorinostat induceert synergetisch apoptose van de gekweekte MCL-cellen en primaire MCL-cellen, potenter dan elk middel afzonderlijk, door de niveaus van cycline D1 en CDK4, evenals c-Myc, c-RAF en Akt, aanzienlijk te verzwakken. [3] In tegenstelling tot 17-AAG dat alleen actief is voor IKKβ in chronische lymfocytische leukemie (CLL) cellen, leidt 17-DMAG behandeling effectief tot uitputting van het Hsp90-cliëntproteïne, resulterend in verminderde NF-κB p50/p65 DNA-binding, verminderde NF-κB targetgen transcriptie en caspase-afhankelijke apoptose. Door de NF-κB-familie te targeten, medieert 17-DMAG selectief dosis- en tijdsafhankelijke cytotoxiciteit tegen CLL-cellen, maar niet tegen normale T-cellen of NK-cellen die belangrijk zijn voor immuunbewaking. [5]

17-DMAG-behandeling met 5 mg/kg of 25 mg/kg driemaal per week vermindert de tumorgroei van TMK-1-xenografts significant, door het vaatgebied en het aantal prolifererende tumorcellen in coupes significant te verminderen. [2] Consistent met de remming van FAK-signalering in vivo, onderdrukt 17-DMAG-behandeling met 25 mg/kg driemaal per week de tumorgroei en metastase van ME180- en SiHa-xenografts bij muizen significant. [4] Toediening van 17-DMAG met 10 mg/kg gedurende 16 dagen vermindert het aantal witte bloedcellen significant en verlengt de overleving in een TCL1-SCID-transplantatiemuismodel. [5]

• Fluorescentiepolarisatie (FP)-gebaseerde competitiebindingsassay

  Deze test gebruikt een boordifluoride dipyrromethene (BODIPY) gelabeld geldanamycine-analoog (BODIPY-AG) als probe en meet fluorescentiepolarisatie bij binding van de probe aan een eiwit. Natief menselijk Hsp90-eiwit (α + β-isoformen) wordt geïsoleerd uit HeLa-cellen. BODIPY-AG-oplossing wordt vers bereid in FP-assaybuffer (20 mM HEPES-KOH, pH 7,3, 1,0 mM EDTA, 100 mM KCl, 5,0 mM MgCl₂, 0,01% NP-40, 0,1 mg/mL vers runder-γ-globuline (BGG), 1,0 mM vers DTT en protease-remmer uit stamoplossing in DMSO. Competitiecurven worden verkregen door 10 μL van elk van een oplossing die BODIPY-AG en Hsp90 bevat, en een seriële verdunning van 17-DMAG vers bereid in FP-assaybuffer uit stamoplossing in DMSO te mengen. De uiteindelijke concentraties zijn 10 nM BODIPY-AG, 40 of 60 nM Hsp90, variërende concentratie van 17-DMAG (0,10 nM-10 μM) en ≤0,25% DMSO in een 384-well microplaat. Na 3 uur incubatie bij 30 °C wordt fluorescentie-anisotropie (γ_Ex = 485 nm, γ_Em = 535 nm) gemeten op een EnVision 2100 multilabelplaatlezer. De IC50-waarde van 17-DMAG wordt verkregen uit de competitiecurven.

• Cellijnen

  Chronic lymphocytic leukemia (CLL)

• Concentraties

  Dissolved in DMSO, final concentrations ~1 μM

• Incubatietijd

  24, or 48 hours

• Methode

  Cells are exposed to various concentrations of 17-DMAG for 24, or 48 hours. For the assessment of cytotoxicity, MTT reagent is then added, and plates are incubated for an additional 24 hours before spectrophotometric measurement. Apoptosis is determined by staining with annexin isothiocyanate and propidium iodide (PI).

• Dierlijke modellen

  SCID mice engrafted with TCL1 leukemia cells

• Doseringen

  10 mg/kg

• Toediening

  Intraperitoneal injection 5 times per week