Afatinib Dimaleate

CatalogusnummerS7810 Batch:S781002

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C24H25ClFN5O3.2C4H4O4
Moleculair gewicht 717.18 CAS-nr. 850140-73-7
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (139.43 mM)
Water Insoluble
Ethanol Insoluble
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Afatinib Dimaleate remt irreversibel EGFR/HER2, inclusief EGFR(wt), EGFR(L858R), EGFR(L858R/T790M) en HER2 met IC50 van respectievelijk 0,5 nM, 0,4 nM, 10 nM en 14 nM; 100-voudig actiever tegen Gefitinib-resistente L858R-T790M EGFR mutant. Afatinib (BIBW2992) Dimaleate induceert autophagy.
Doelen
EGFR (L858R)
(Cell-free assay)		 EGFR (wt)
(Cell-free assay)		 EGFR (L858R/T790M)
(Cell-free assay)		 HER2
(Cell-free assay)
0.4 nM 0.5 nM 10 nM 14 nM
In vitro BIBW2992 is effectiever dan erlotinib, gefitinib of lapatinib in het remmen van de overleving van longkankercellijnen die wild-type (H1666) of L858R/T790M (NCI-H1975) EGFR bevatten. BIBW2992 is even effectief tegen NSCLC-lijnen die HER2 776insV (NCI-H1781) of EGFR E746_A750del (HCC827) tot expressie brengen, maar vertoont geen activiteit ten opzichte van A549-cellen, die wild-type EGFR en HER2 tot expressie brengen. Afatinib verhoogt de cytotoxiciteit van topotecan en mitoxantrone voor SP-cellen, en verhoogt de apoptose geïnduceerd door topotecan en mitoxantrone in SP-cellen.
In vivo In het MDA-MB-453 xenograft-model resulteert BIBW2992 (20 mg/kg, p.o.) in een dramatische tumorregressie met een cumulatieve behandelde/controle tumorvolumeverhouding (T/C ratio) van 2%, en downregulatie van EGFR en AKT fosforylering. In A7, A431, FaDu, UT-SCC-14 en UT-SCC-15 xenograft-modellen leidt de toepassing van BIBW 2992 (30 mg/kg, p.o.) tot een significante verlenging van de tumorgroeitijd. In een HER2-geamplificeerd xenograft-model resulteert Afatinib (30 mg/kg, p.o.) in een duidelijke remming van tumorgroei en een significante verbetering van de duur van de algehele overleving. In HER2-positieve maagkanker NCI-N87 xenograft leidt afatinib (25 mg/kg, p.o.) tot dramatische tumorvolumeregressie binnen 4 dagen en bijna volledige tumorresolutie na 21 dagen behandeling.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:[1]
  • In vitro kinase-activiteitsassay

    EGFR-kinase: Elke 100 µL enzymreactie bevatte 10 μL van de remmer in 50% Me2SO, 20 μL substraatoplossing (200 mM HEPES pH 7,4, 50 mM Mg-acetaat, 2,5 mg/mL poly (EY), 5 μg/mL bio-pEY) en 20 µL enzympreparaat. De enzymatische reactie wordt gestart door toevoeging van 50 µL van een 100 µM ATP-oplossing gemaakt in 10 mM MgCl2. Assays worden uitgevoerd bij kamertemperatuur gedurende 30 min en beëindigd door toevoeging van 50 µL stopoplossing (250 mM EDTA in 20 mM HEPES pH 7,4). 100 µL worden overgebracht naar een met streptavidine gecoate microtiterplaat, na een incubatietijd van 60 min bij kamertemperatuur wordt de plaat gewassen met 200 µL wasoplossing (50 mM Tris, 0,05% Tween20). Een 100 µL aliquot van een HRPO-gelabelde anti-PY antilichaam (PY20H Anti-Ptyr:HRP) 250 ng/mL wordt aan de putjes toegevoegd. Na 60 min incubatie wordt de plaat drie keer gewassen met een 200 µL wasoplossing. De monsters worden vervolgens ontwikkeld met een 100 µL TMB Peroxidase-oplossing (A:B= 1:1). De reactie wordt na 10 min gestopt. De plaat wordt overgebracht naar een ELISA-lezer en extinctie wordt gemeten bij OD450nm. HER2-IC enzym: Enzymactiviteit wordt bepaald in aanwezigheid of afwezigheid van seriële remmerverdunningen uitgevoerd in 50% Me2SO. Elke 100 µL reactie bevat vergelijkbare componenten als beschreven voor de EGFR-kinase assay met toevoeging van 1000 µM Na3VO4. De enzymatische reactie wordt gestart door toevoeging van 50 µL van 500 µM ATP-oplossing gemaakt in 10 mM Mg-acetaat. De verdunning van het enzym is zo ingesteld dat incorporatie van fosfaat in bio-pEY lineair is ten opzichte van tijd en hoeveelheid enzym. Het enzympreparaat wordt verdund in 20 mM HEPES pH 7,4, 130 mM NaCl, 0,05% Triton X-100, 1 mM DTT en 10% glycerol. Assays worden uitgevoerd bij kamertemperatuur gedurende 30 min en beëindigd door toevoeging van 50 µL stopoplossing. Src-kinase assays: Elke 100 µL reactie bevatte 10 µL remmer in 50% Me2SO, 20 µL enzympreparaat, 20 µL substraatoplossing aangevuld met 1000 µM Na3VO4. De enzymatische reactie wordt gestart door toevoeging van 50 µL van een 1000 µM ATP-oplossing gemaakt in 10 mM Mg-acetaat. BIRK-kinase assay: 250 mM Tris pH 7,4, 10 mM DTT, 2,5 mg/mL poly(EY), 5 mg/mL bio-pEY wordt gebruikt als substraatoplossing en de enzymatische reactie wordt gestart door toevoeging van 50 µL van een 2 mM ATP-oplossing gemaakt in 8 mM MnCl2, 20 mM Mg-acetaat. VEGF2 en HGFR kinase assays: Assays worden uitgevoerd bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten en beëindigd door toevoeging van 10 µL 5% H3PO4. Het precipitaat wordt vervolgens op GF/B-filters gevangen met behulp van een 96-well filter mate universele harvester. Na uitgebreid wassen wordt de filterplaat gedroogd gedurende 1 uur bij 50°C, verzegeld en wordt de geïncorporeerde radioactiviteit bepaald door scintillatietelling met behulp van een TopCount™ of een Microbeta b counter™.
Celassay:[2]
  • Cellijnen

    SP and NSP cell lines

  • Concentraties

    1 μM

  • Incubatietijd

    48 h

  • Methode

    Cytotoxicity is determined using MTT assay. The IC 50 value is defined as the drug concentration resulting in 50% cell death. Both the fitted sigmoidal dose response curve and IC50 are calculated by Bliss method.
Dierstudie:[4]
  • Dierlijke modellen

    SCID mice harbouring ARK2 xenografts

  • Doseringen

    25 mg/kg

  • Toediening

    p.o.

Referenties

  • http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2748240/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24972892/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25444177/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/25268372/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23578997/

Klantproductvalidatie

<p>Inhibition of signaling pathway activation in lung tumor cell lines by kinase inhibitors. Lung tumor cells were cultured in 10% FBS until reaching ∼80% confluence and then the cells were starved in serum-free medium for overnight, followed by 4-hour treatment with the inhibitors. Cell lysates were then prepared and used for determination of the pathway activation signals by the CEER assay.</p>

Gegevens van [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

<p>Inhibition of anchorage-independent growth of lung tumor cell lines by selected inhibitors. Each selected cell line was treated with the indicated inhibitor at 0.1 μM and 1 μM concentrations for two weeks and cell colony size formation was scored under the Nikon inverted-phase microscope.</p>

Gegevens van [ Int J Proteomics , 2011 , 215496 ]

(F) Stably transduced MCF10A cells were treated with the indicated drugs at 100 nM for 4 h in EGF- and serum-free media. Cell lysates were subjected to immunoblot analyses with the indicated antibodies.

Gegevens van [ , , Cancer Discov, 2017, 7(6):575-585 ]

Immunoblotting of lysates from EGFR L858R and EGFR L858M/L861Q NIH-3T3 cells treated with the indicated concentrations of gefitinib, osimertinib, or afatinib. The ratio of phospho-EGFR in treated vs. untreated samples was quantified by densitometry for each cell line.

Gegevens van [ , , J Thorac Oncol, 2017, 12(5):884-889 ]

Sellecks Afatinib Dimaleate Is geciteerd door 173 Publicaties

Human fetal brain self-organizes into long-term expanding organoids [ Cell, 2024, 187(3):712-732.e38] PubMed: 38194967
Clinical efficacy and identification of factors confer resistance to afatinib (tyrosine kinase inhibitor) in EGFR-overexpressing esophageal squamous cell carcinoma [ Signal Transduct Target Ther, 2024, 9(1):153] PubMed: 38937446
Romidepsin and afatinib abrogate JAK-STAT signaling and elicit synergistic antitumor effects in cutaneous T-cell lymphoma [ J Invest Dermatol, 2024, S0022-202X(23)03210-4] PubMed: 38219917
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
HB-EGF activates EGFR to induce reactive neural stem cells in the mouse hippocampus after seizures [ Life Sci Alliance, 2024, 7(9)e202201840] PubMed: 38977310
Discovery of nontriterpenoids from the rot roots of Panax notoginseng with cytotoxicity and their molecular docking study and experimental validation [ RSC Adv, 2023, 13(16):11037-11043] PubMed: 37033442
Irreversible tyrosine kinase inhibitors induce the endocytosis and downregulation of ErbB2 [ Biochem Biophys Rep, 2023, 34:101436] PubMed: 36824069
Silent mutations reveal therapeutic vulnerability in RAS Q61 cancers [ Nature, 2022, 603(7900):335-342] PubMed: 35236983
Group 3 innate lymphoid cells produce the growth factor HB-EGF to protect the intestine from TNF-mediated inflammation [ Nat Immunol, 2022, 23(2):251-261] PubMed: 35102343
PI3Kγ stimulates a high molecular weight form of myosin light chain kinase to promote myeloid cell adhesion and tumor inflammation [ Nat Commun, 2022, 13(1):1714] PubMed: 35361816

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.