Temsirolimus (CCI-779)

CatalogusnummerS1044 Batch:S104420

Afdrukken

Technische gegevens

Formule

C56H87NO16
Moleculair gewicht 1030.29 CAS-nr. 162635-04-3
Oplosbaarheid (25°C)* In vitro DMSO 100 mg/mL (97.06 mM)
Ethanol 100 mg/mL (97.06 mM)
Water Insoluble
In vivo (Voeg oplosmiddelen afzonderlijk en in volgorde toe aan het product.)
Homogeneous suspension
CMC-NA
≥5mg/ml Taking the 1 mL working solution as an example, add 5 mg of this product to 1 ml of CMC-Na solution, mix evenly to obtain a homogeneous suspension with a final concentration of 5 mg/ml.
Clear solution
5%DMSO 40%PEG300 5%Tween80 50%ddH2O

Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.

 1.650mg/ml (1.60mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 33 mg/ml clarified DMSO stock solution to 400 μL of PEG300, mix evenly to clarify it; add 50 μL of Tween80 to the above system, mix evenly to clarify; then continue to add 500 μL of ddH2O to adjust the volume to 1 mL. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
Clear solution
5% DMSO 95% Corn oil

Gevalideerd door Selleck labs. Mocht u aanpassingen aan deze formulering nodig hebben, neem dan contact op met ons verkoopteam voor maatwerktesten.

 0.700mg/ml (0.68mM) Taking the 1 mL working solution as an example, add 50 μL of 14 mg/ml clear DMSO stock solution to 950 μL of corn oil and mix evenly. The mixed solution should be used immediately for optimal results. 
* <1 mg/ml betekent licht oplosbaar of onoplosbaar.
* Houd er rekening mee dat Selleck de oplosbaarheid van alle verbindingen intern test en de werkelijke oplosbaarheid enigszins kan afwijken van gepubliceerde waarden. Dit is normaal en is te wijten aan lichte batch-tot-batch variaties.
* Verzending op kamertemperatuur (Stabiliteitstests tonen aan dat dit product zonder koelmaatregelen kan worden verzonden.)

Voorbereiden van stamoplossingen

Biologische activiteit

Beschrijving Temsirolimus is een specifieke mTOR-remmer met een IC50 van 1,76 μM in een celvrije test. Temsirolimus induceert Autophagy en Apoptosis.
Doelen
mTOR
(Cell-free assay)
1.76 μM
In vitro Bij afwezigheid van FKBP12 remt Temsirolimus de mTOR-kinaseactiviteit potent met een IC50 van 1,76 μM, vergelijkbaar met die van rapamycine met een IC50 van 1,74 μM. Behandeling met deze verbinding bij nanomolaire concentraties (10 nM tot <5 μM) vertoont een bescheiden en selectieve antiproliferatieve activiteit via een FKBP12-afhankelijk mechanisme, maar kan de proliferatie van een breed scala aan tumorcellen volledig remmen bij lage micromolaire concentraties (5-15 μM), waarbij FKBP12-onafhankelijke onderdrukking van mTOR-signalering betrokken is. Deze chemische behandeling bij micromolaire, maar niet nanomolaire, concentraties (20 μM) veroorzaakt een duidelijke daling van de globale eiwitsynthese en de demontage van polyribosomen, gepaard gaande met een snelle toename van de fosforylering van translatie-elongatiefactor eEF2 en de translatie-initiatiefactor eIF2A. Het remt de fosforylering van ribosomaal eiwit S6, krachtiger in PTEN-positieve DU145-cellen dan in PTEN-negatieve PC-3-cellen, en remt celgroei en clonogene overleving van beide cellen op een concentratieafhankelijke manier. Deze verbinding (100 ng/mL) remt krachtig de proliferatie en induceert apoptosis in primaire humane acute lymfoblastische leukemie (ALL) cellen.
In vivo In de NOD/SCID xenograftmodellen met humane ALL produceert Temsirolimus-behandeling met 10 mg/kg/dag een afname van perifere bloedblasten en splenomegalie Toediening van deze verbinding (20 mg/kg i.p. 5 dagen/week) vertraagt de groei van DAOY xenografts significant met 160% na 1 week en 240% na 2 weken, vergeleken met controles. Een enkele hoge dosis van deze chemische stof (100 mg/kg i.p.) induceert 37% regressie van het tumorvolume binnen 1 week. Deze verbinding-behandeling gedurende 2 weken vertraagt ook de groei van rapamycine-resistente U251 xenografts met 148%. Remming van mTOR door dit middel verbetert de prestaties bij vier verschillende gedragstaken en vermindert aggregaatvorming in een muismodel van de ziekte van Huntington. Toediening van deze verbinding induceert significante dosisafhankelijke antitumorale responsen tegen subcutane groei van 8226, OPM-2 en U266 xenografts met ED50 van respectievelijk 20 mg/kg en 2 mg/kg voor 8226 en OPM-2, die geassocieerd zijn met geremde proliferatie en angiogenese, inductie van apoptosis en vermindering van de tumorgrootte.

Protocol (uit referentie)

Kinase-assay:

[1]
  • In vitro assay van mTOR katalytische activiteit

    De Flag-getagde wild-type humane mTOR (Flag-mTOR) DNA-constructen worden tijdelijk getransfecteerd in HEK293-cellen. Eiwitextractie en -zuivering van Flag-mTOR worden 48 uur later uitgevoerd. In vitro kinase-assays van gezuiverd Flag-mTOR in aanwezigheid van verschillende concentraties Temsirolimus zonder FKBP12 worden uitgevoerd in een 96-wells plaat en gedetecteerd door dissociatie-versterkte lanthanide fluorescerende immunoassay (DELFIA) met His6-S6K1 als substraat. Enzymen worden eerst verdund in kinase-assaybuffer (10 mM Hepes (pH 7,4), 50 mM NaCl, 50 mM β-glycerofosfaat, 10 mM MnCl2, 0,5 mM DTT, 0,25 μM microcystine LR en 100 μg/mL BSA). Aan elk putje wordt 12 μL van het verdunde enzym kort gemengd met 0,5 μL van deze verbinding. De kinase-reactie wordt geïnitieerd door 12,5 μL kinase-assaybuffer met ATP en His6-S6K toe te voegen, om een finaal reactievolume van 25 μL te verkrijgen met 800 ng/mL FLAG-mTOR, 100 μM ATP en 1,25 μM His6-S6K. De reactieplaat wordt gedurende 2 uur (lineair bij 1-6 uur) bij kamertemperatuur geïncubeerd onder zacht schudden en vervolgens gestopt door toevoeging van 25 μL stopbuffer (20 mM Hepes (pH 7,4), 20 mM EDTA en 20 mM EGTA). De DELFIA-detectie van het gefosforyleerde (Thr-389) His6-S6K wordt uitgevoerd bij kamertemperatuur met behulp van een monoklonaal anti-P(T389)-p70S6K-antilichaam gelabeld met Europium-N1-ITC (Eu) (10,4 Eu per antilichaam). 45 μL van het beëindigde kinase-reactiemengsel wordt overgebracht naar een MaxiSorp-plaat met 55 μL PBS. De His6-S6K mag gedurende 2 uur binden, waarna de putjes worden geaspireerd en eenmaal gewassen met PBS. 100 μL DELFIA-buffer met 40 ng/mL Eu-P(T389)-S6K-antilichaam wordt toegevoegd. De antilichaambinding wordt gedurende 1 uur voortgezet onder zachte agitatie. De putjes worden vervolgens geaspireerd en viermaal gewassen met PBS dat 0,05% Tween 20 (PBST) bevat. 100 μL DELFIA Enhancement-oplossing wordt aan elk putje toegevoegd en de platen worden afgelezen in een PerkinElmer Victor model platenlezer.
Celassay:

[1]
  • Cellijnen

    A549, H157, H460, H446, HCT116, HT29, SW480, DLD1, Caco2, LNCap, DU145, MDA468, MDA231, HEK293, and PC3-MM2

  • Concentraties

    Dissolved in DMSO, final concentrations ~20 μM

  • Incubatietijd

    72 hours

  • Methode

    Cells are exposed to various concentrations of Temsirolimus for 72 hours. After treatment, viable cell densities are determined by MTS dye conversion using CellTiter AQ assay kit.
Dierstudie:

[4]
  • Dierlijke modellen

    Female athymic nude mice injected s.c. with DAOY, or U251 cells

  • Doseringen

    20 mg/kg

  • Toediening

    Injection daily 5 times per week

Referenties

  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/18413763/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15805283/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16195324/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/11245461/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15146184/
  • https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15304393/

Klantproductvalidatie

mTOR inhibitors attenuate ganetespib-driven elevation of HSPs in multiple tumor cell types. A375 melanoma cells were treated with vehicle, ganetespib (25 nmol/L), BEZ235 (500 nmol/L), or temsirolimus (500 nmol/L), either alone or in combination, for 24 hours. The levels of HSP90α, HSP70, HSP27, and GAPDH were determined by immunoblotting.

Gegevens van [ Mol Cancer Res , 2014 , 12, 703-13 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered 25 mg/kg erlotinib once daily for 4 days or 50 mg/kg temsirolimus once from day 8. Four hours after final erlotinib administration, tumors were harvested, and the relative levels of proteins in the tumor lysates were determined by western blotting.

Gegevens van [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

SCID mice with PC-9/Vec or PC-9/HGF tumors were administered as described in Figure. Four hours after final administration of erlotinib, tumors were harvested, and tumor cell angiogenesis (CD31) were determined by immunohistochemistry.

Gegevens van [ PLoS One , 2013 , 8, e62104 ]

<p>Breast cancer cells were pretreated with 100ng/ml EGF for 15 min and then treated with the indicated concentrations of Temsirolimus for 24 hours.</p><div><div> </div></div><p> </p>

, , Dr. Zhang of Tianjin Medical University

Sellecks Temsirolimus (CCI-779) Is geciteerd door 108 Publicaties

Haploinsufficiency of miR-143 and miR-145 reveal targetable dependencies in resistant del(5q) myelodysplastic neoplasm [ Leukemia, 2025, 39(4):917-928] PubMed: 40000845
Multi-layer stratified oncology platform utilizing transcriptomics, prostate cancer organoids, and modeling of drug response [ J Exp Clin Cancer Res, 2025, 44(1):290] PubMed: 41094672
PI3K/AKT signaling mediates stress-inducible amyloid formation through c-Myc [ Cell Rep, 2025, 44(5):115617] PubMed: 40272983
Lactate shuttle between cytotrophoblast and syncytiotrophoblast in the placenta enhances ferroptosis resistance and maintains placental homeostasis: implications for early pregnancy loss [ Cell Commun Signal, 2025, 23(1):438] PubMed: 41088442
Molecular control of PDPNhi macrophage subset induction by ADAP as a host defense in sepsis [ JCI Insight, 2025, e186456] PubMed: 39903516
A high-throughput screening platform to identify MYCN expression inhibitors for liver cancer therapy [ Front Oncol, 2025, 15:1486671] PubMed: 40027135
Single-Molecule-Based, Label-Free Monitoring of Molecular Glue Efficacies for Promoting Protein-Protein Interactions Using YaxAB Nanopores [ ACS Nano, 2024, 18(45):31451-31465] PubMed: 39482865
The mTOR pathway controls phosphorylation of BRAF at T401 [ Cell Commun Signal, 2024, 22(1):428] PubMed: 39223665
Patient-derived rhabdomyosarcoma cells recapitulate the genetic and transcriptomic landscapes of primary tumors [ iScience, 2024, 27(10):110862] PubMed: 39319271
Enzymatic depletion of circulating glutamine is immunosuppressive in cancers [ iScience, 2024, 27(6):109817] PubMed: 38770139

RETOURBELEID
Selleck Chemicals onvoorwaardelijke retourbeleid zorgt voor een soepele online winkelervaring voor onze klanten. Als u op enigerlei wijze ontevreden bent met uw aankoop, kunt u elk artikel(en) binnen 7 dagen na ontvangst retourneren. In geval van problemen met de productkwaliteit, zowel protocolgerelateerde als productgerelateerde problemen, kunt u elk artikel(en) binnen 365 dagen na de oorspronkelijke aankoopdatum retourneren. Volg de onderstaande instructies bij het retourneren van producten.

VERZENDING EN OPSLAG
Selleck producten worden bij kamertemperatuur vervoerd. Als u het product op kamertemperatuur ontvangt, wees dan gerust, de Selleck kwaliteitsinspectieafdeling heeft experimenten uitgevoerd om te controleren of de normale temperatuurplaatsing van één maand de biologische activiteit van poederproducten niet beïnvloedt. Na ontvangst dient u het product op te slaan volgens de vereisten beschreven in het gegevensblad. De meeste Selleck producten zijn stabiel onder de aanbevolen omstandigheden.

NIET VOOR HUMANE, VETERINAIRE DIAGNOSTISCHE OF THERAPEUTISCHE DOELEINDEN.