TW-37

TW-37 richt zich op de BH3-bindende groeve in Bcl-2 waar pro-apoptotische Bcl-2-eiwitten binden, en vertoont een hogere affiniteit en selectiviteit voor Bcl-2 en Mcl-1 dan voor Bcl-xL met Ki-waarden van respectievelijk 0,29 μM, 0,26 μM en 1,11 μM. [1] In vitro vertoont dit middel een significant antiproliferatief en pro-apoptotisch effect in een de novo chemoresistente WSU-DLCL2 lymfoomcellijn en primaire cellen verkregen van een lymfoompatiënt zonder effecten op normale perifere bloedlymfocyten. [1] Het vertoont het remmende effect op zowel celgroei als celdood in endotheelcellen met een IC50 van ongeveer 1,8 μM zonder effect op de fibroblasten die aan hetzelfde concentratiebereik werden blootgesteld als de endotheelcellen. Bovendien vertoont dit chemische middel ook de antiproliferatieve effecten in MCF-7, LNCaP en SLK tumorcellijnen met hetzelfde of een lager concentratiebereik dan nodig is om de groei van endotheelcellen te remmen. [2]

TW-37 vertoont een maximaal getolereerde dosis (MTD) van 40 mg/kg voor drie i.v.-injecties in ernstig gecombineerde immuundeficiënte (SCID) muizen wanneer alleen toegediend, en versterkt het tumorremmende effect van het CHOP-regime. [1] Dit middel, toegediend via i.v., produceert het anti-angiogene effect door de dichtheid van functionele menselijke microvaten te verminderen in het SCID-muismodel van menselijke angiogenese. [2] De combinatie van dit chemische middel en MEK-remmers blokkeert synergistisch de groei van melanoomcellen bij muizen door een significante vermindering van het tumorvolume en de tumormassa. [3]

• Fluorescentiepolarisatie-gebaseerde bindingsassay voor recombinant Bcl-2, Bcl-XL en Mcl-1 eiwit

  Voor deze assay worden het 21-residu BH3-peptide QEDIIRNIARHLAQVGDSMDR afgeleid van Bid gelabeld met het FAM-Bid en recombinante eiwitten afgeleid van menselijk Bcl-2, Bcl-X L en Mcl-1 gebruikt. Er wordt vastgesteld dat FAM-Bid een K_i heeft van 11 nM voor Bcl-2-eiwit, 25 nM voor Bcl-XL-eiwit en 5,7 nM voor Mcl-1-eiwit. De competitieve bindingsassay voor Bcl-XL is hetzelfde als die voor Bcl-2 met de volgende uitzonderingen: 30 nM Bcl-XL-eiwit en 2,5 nM FAM-Bid-peptide in de volgende assaybuffer [50 mM Tris-Bis (pH 7.4) en 0,01% runderserum-gamma-globuline].

• Cellijnen

  HDMECs

• Concentraties

  0 - 100 μM

• Incubatietijd

  96 hours

• Methode

  The sulforhodamine B (SRB) cytotoxicity assay is used as described. Briefly, optimal cell density for cytotoxicity assay is determined by growth curve analysis. HDMECs are seeded in a 96-well plate and allowed to adhere overnight. Drug or control is diluted in EGM2-MV and layered onto cells, which are allowed to incubate for times as indicated in the figures. Alternatively, HDMECs are coincubated with TW37 and 0 to 100 ng/mL recombinant human VEGF (rhVEGF)165 or 0 to 100 ng/mL recombinant human CXCL8. Cells are fixed on the plates by addition of cold trichloroacetic acid (10% final concentration) and incubation for 1 hour at 4 °C. Cellular protein is stained by addition of 0.4% SRB in 1% acetic acid and incubation at room temperature for 30 minutes. Unbound SRB is removed by washing with 1% acetic acid and the plates are air dried. Bound SRB is resolubilized in 10 mM unbuffered Tris-base and absorbance is determined on a microplate reader at 560 nm. Test results are normalized against initial plating density and drug-free controls. Data are obtained from triplicate wells per condition and are representative of at least three independent experiments

• Dierlijke modellen

  Athymic NCr-nu/nu mice bearing SK-Mel-147 melanoma xenografts

• Doseringen

  ~40 mg/kg

• Toediening

  Administered via i.v. or i.p.