SRT1720 HCl

De maximale activeringsverhouding van SRT1720 versus de dichtstbijzijnde sirtuin-homologen, SIRT2 (EC1.5 = 37 μM) en SIRT3 (EC1.5 > 300 μM), bedraagt tot 781%. SRT1720 bindt aan het SIRT1 enzym-peptide substraatcomplex op een allosterische plaats amino-terminaal van het katalytische domein en verlaagt de Michaelis-constante voor geacetyleerde substraten. SRT1720 zou de nuchtere glucosewaarden kunnen verlagen. SRT1720 heeft geen effect op de nuchtere glucose bij muizen die met standaardvoer werden gevoed, wat aantoont dat farmacologische SIRT1-activering waarschijnlijk geen hypoglykemie zal veroorzaken. SRT1720 vermindert de hyperinsulinemie significant na 4 weken, waardoor de verhoogde insulinespiegels gedeeltelijk worden genormaliseerd. De behandeling met SRT1720 verhoogt de mitochondriale capaciteit met 15% in de gastrocnemiusspier, gemeten aan de hand van de citraatsynthaseactiviteit. [1] Hogere concentraties SRT1720 (15 μM) veroorzaken een bescheiden (10-20%) afname van de normale cellevensvatbaarheid. SRT1720 remt ook significant VEGF-afhankelijke MM-celmigratie. [2]

Bij DIO-muizen bootst SRT1720 verschillende effecten na die werden waargenomen na calorierestrictie, waaronder verbeterde insulinegevoeligheid, genormaliseerde glucose- en insulinespiegels en verhoogde mitochondriale capaciteit. Bovendien verbetert SRT1720 bij dieet-geïnduceerde obese en genetisch obese muizen de insulinegevoeligheid, verlaagt het de plasma glucose en verhoogt het de mitochondriale capaciteit. SRT1720 is dus een veelbelovend nieuw therapeutisch middel voor de behandeling van verouderingsziekten zoals type 2 diabetes. In overeenstemming met een verbeterde glucosetolerantie, is de glucose-infusiesnelheid die nodig is om euglykemie te handhaven ongeveer 35% hoger bij met SRT1720 behandelde fa/fa ratten, en de totale glucoseafvoersnelheid is met ongeveer 20% verhoogd. [1] SRT1720 voorkomt ook de groei van multiple myeloomtumoren. 

• SIRT1 fluorescentiepolarisatie-assay

  In de SIRT1 FP-assay wordt de SIRT1-activiteit gemonitord met behulp van een 20-aminozuurpeptide (Ac-Glu-Glu-Lys(biotine)-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Ser-His-Ser-Lys(Ac)-Nle-Ser-Thr-Glu-Gly–Lys(MR121 of Tamra)-Glu-Glu-NH₂) afgeleid van de sequentie van p53. Het peptide is N-terminaal gekoppeld aan biotine en C-terminaal gemodificeerd met een fluorescerende tag. De reactie voor het monitoren van enzymactiviteit is een gekoppelde enzymassay waarbij de eerste reactie de deacetyleringsreactie is die door SIRT1 wordt gekatalyseerd en de tweede reactie de splitsing door trypsine is bij het nieuw blootgestelde lysine-residu. De reactie wordt gestopt en streptavidine wordt toegevoegd om de massaverschillen tussen substraat en product te accentueren. De gevoeligheid van de FP-assay maakt de identificatie van SRT1720 mogelijk. De reactiecondities voor fluorescentiepolarisatie zijn als volgt: 0,5 μM peptide substraat, 150 μM βNAD⁺, 0-10 nM SIRT1, 25 mM Tris-acetaat pH 8, 137 mM Na-Ac, 2,7 mM K-Ac, 1 mM Mg-Ac, 0,05% Tween-20, 0,1% Pluronic F127, 10 mM CaCl 2, 5 mM DTT, 0,025% BSA en 0,15 mM nicotinamide. De reactie wordt geïncubeerd bij 37 °C en gestopt door toevoeging van nicotinamide, en trypsine wordt toegevoegd om het gedeacetyleerde substraat te splitsen. Deze reactie wordt geïncubeerd bij 37 °C in aanwezigheid van 1 μM streptavidine. Fluorescerende polarisatie wordt bepaald bij excitatie (650 nm) en emissie (680 nm) golflengten.

• Cellijnen

  Human vascular endothelial cells (HUVECs)

• Concentraties

  5 μM

• Incubatietijd

  2 hours

• Methode

  Transwell Insert Assays are utilized to measure migration. In vitro angiogenesis is assessed by Matrigel capillary-like tube structure formation assay. For endothelial tube formation assay, human vascular endothelial cells (HUVECs) are obtained from Clonetics and maintained in endothelial cell growth medium-2 containing 5% FBS. After three passages, HUVEC cell viability is measured with the trypan blue exclusion assay, and <5% of cell death is observed with SRT1720 treatment.

• Dierlijke modellen

  Chase-SCID mice with MM.1S cells

• Doseringen

  200 mg/kg

• Toediening

  Orally