NSC 74859 (S3I-201)

NSC 74859 (S3I-201) remt de groei en induceert apoptose bij voorkeur in tumorcellen die persistent geactiveerde Stat3 bevatten door de vorming van het Stat3·Stat3-complex en de DNA-bindende en transcriptionele activiteiten van Stat3 te remmen. Bovendien remt het ook de expressie van de Stat3-gereguleerde genen die coderen voor cycline D1, Bcl-xL en survivin. [1] Deze verbinding remt de borstcarcinoom MDA-MB-435, MDA-MB-453 en MDA-MB-231 cellijnen met een IC50 van 100 μM. Bovendien zijn de cellen met een verminderde TGF-β-signalering vier keer zo gevoelig voor S3I-201. [2] Een recente studie toont aan dat het het antiproliferatieve effect in HepG2- en Huh-7-cellen versterkt via de STAT3-signaleringsroute. [3]

NSC 74859 (S3I-201) (5 mg/kg, i.v. elke 2 of elke 3 dagen) toont de antitumorale werkzaamheid in muismodellen met menselijke borsttumor xenografts die constitutief actieve Stat3 bevatten. [1] Deze verbindingbehandeling vermindert Varicella-zoster virus (VZV) replicatie op basis van het bioluminescentiesignaal en het aantal positieve huidxenografts vergeleken met met DMSO behandelde muizen door STAT3-fosforylatie te remmen. [4]

• In vitro Stat3 DNA-bindingstest en EMSA-analyse

  Kort gezegd wordt 100 μL biotinyl-e-Ac-EPQpYEEIEL-OH (in 50 mM Tris/150 mM NaCl, pH 7.5) toegevoegd aan elk putje van met streptavidine gecoate 96-wells microtiterplaten en ‘s nachts bij 4 °C geschud. Vervolgens worden de platen gespoeld met PBS/Tween 20 en daarna tweemaal met 200 μL BSA-T-PBS (0.2% BSA/0.1% Tween 20/PBS). Daarna wordt 50 μL Lck-SH2-GST fusie-eiwit (6.4 ng/ml in BSA-T-PBS) toegevoegd aan elk putje van de 96-wells plaat in aanwezigheid en afwezigheid van 50 μL NSC 74859 (S3I-201) (voor finale concentraties van 30 en 100 mM), en de plaat wordt gedurende 4 uur bij kamertemperatuur geschud. Nadat de oplossingen zijn verwijderd, wordt elk putje viermaal gespoeld met BSA-T-PBS (200 μL), en wordt 100 μL polyclonaal konijnen-anti-GST-antilichaam (100 ng/mL in BSA-T-PBS) toegevoegd aan elk putje en ‘s nachts bij 4 °C geïncubeerd. Na wassen met BSA-T-PBS wordt 100 μL van 200 ng/mL BSA-T-PBS mierikswortelperoxidase-geconjugeerd muis-anti-konijnenantilichaam toegevoegd aan elk putje en gedurende 45 minuten bij kamertemperatuur geïncubeerd. Na vier wasstappen met BSA-T-PBS en drie wasstappen met PBS-T, wordt 100 μL peroxidase-substraat toegevoegd aan elk putje en gedurende 5-15 minuten geïncubeerd. De peroxidase-reactie wordt gestopt door 100 μL 1 M zwavelzuuroplossing toe te voegen, en de absorptie wordt afgelezen bij 450 nm met een ELISA-plaatlezer.

• Cellijnen

  MDA-MB-435, MDA-MB-453 and MDA-MB-231 cells lines

• Concentraties

  ~ 250 μM

• Incubatietijd

  72 hours

• Methode

  The MTT assay is based on the conversion of the yellow tetrazolium salt MTT to purple formazan crystals by metabolically active cells. The MTT assay provides a quantitative determination of viable cells. Cells are seeded in 96-well microplates in complete culture medium in the absence or presence of increasing serial dosages of NSC 74859 (S3I-201) as indicated. At 72 hours after culture, the number of viable cells is measured by adding 100 μL/well of 2 mg/mL MTT solution. After 2 hours, the medium is removed. The absorbance is read at 590 nm with an enzyme-linked immunosorbent assay reader. Each treatment point is performed in 10 wells or sextuplicate.

• Dierlijke modellen

  Human breast cancer MDA-MB-231 cells are injected s.c. into the left flank of athymic nu/nu mice.

• Doseringen

  ≤5 mg/kg

• Toediening

  Administered via i.v.